[發明專利]紅曲米固態發酵生產凝乳酶的方法

無效

• 申請號: 200910020236.0
• 申請日: 2009-03-30
• 公開（公告）號: CN101514336A
• 公開（公告）日: 2009-08-26
• 發明（設計）人: 王成忠;于功明;顧振磊
• 申請（專利權）人: 山東輕工業學院
• 主分類號: C12N9/64
• 分類號: C12N9/64;C12R1/66
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司
• 代理人: 周慰曾

1.一種紅曲米固態發酵制備凝乳酶的方法，步驟如下：

1)紅曲米粉碎成粉狀，細度200-400目，將紅曲米粉接種到固態發酵培養基上，28-30℃恒溫培養90-96h；

所述的固態發酵培養基是：按干物質的質量百分比麩皮40％-50％和豆粕50％-60％，加入麩皮與豆粕總質量0.5％-1％的葡萄糖，加水使固液比1∶1.5-1∶2質量比；

2)向上述步驟1)得到的培養物中加入蒸餾水，蒸餾水體積是培養物體積的2-2.5倍，抽濾，取濾液，旋轉蒸發儀濃縮至原體積1/3-1/4，得凝乳酶溶液；

3)向上述步驟2)得到的凝乳酶溶液加入乙醇進行醇沉兩次，兩次醇沉中使用的乙醇體積均是凝乳酶溶液體積的2-3倍，4-6℃低溫離心，冷凍升華干燥，即為凝乳酶粗酶；

第一次醇沉中使用的乙醇濃度為72％wt，第二次醇沉中使用的乙醇濃度為95％wt；

4)將上述步驟3)得到的凝乳酶粗酶溶于pH為6.2的磷酸緩沖液中，即為凝乳酶粗液；

5)使用Sephadex?G-75凝膠柱層析純化步驟4)得到的凝乳酶粗液，以pH6.2的磷酸緩沖液作為洗脫液，分步收集，檢驗收集液的活性，合并有活性的洗脫液；

6)利用DEAE-纖維素52對上述步驟5)得到的洗脫液進一步純化，以pH7.2的磷酸鹽緩沖液為起始緩沖液，采用NaCl梯度洗脫，分步收集，檢測活性，合并有活性洗脫液，濃縮凍干得凝乳酶；

所述采用NaCl梯度洗脫是用0.15mol/L、0.25mol/L、0.35mol/L、0.45mol/L和0.55mol/LNaCl濃度的緩沖液進行梯度洗脫。?