[發明專利]一種改進的GFP表達細胞的增殖檢測方法

無效

• 申請號: 200910018235.2
• 申請日: 2009-09-01
• 公開（公告）號: CN101643780A
• 公開（公告）日: 2010-02-10
• 發明（設計）人: 王旭平
• 申請（專利權）人: 山東大學齊魯醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/00;G01N21/64
• 代理公司: 濟南圣達專利商標事務所有限公司
• 代理人: 楊 琪

1.一種改進的GFP表達細胞的增殖檢測方法，其特征在于：對以綠色熒光蛋白作為報告蛋 白的細胞進行BrdU標記檢測和DAPI復染，然后常規防熒光淬滅劑封片，熒光顯微鏡觀 察，拍照；具體步驟如下：

1)向表達GFP的細胞內加入BrdU至終濃度30μg/ml，37℃培養條件下摻入0.5～3h；

2)以Hank’s液配制0.1％甲醛，培養條件下固定細胞10～12h；

3)Hank’s液沖洗3次，每次5min；

4)0.2％Triton?X-100作用20min；

5)Hank’s液沖洗3次，每次5min；

6)100U/ml?DNase?I，室溫處理5min；

7)TBS沖洗3次，每次5min；

8)室溫封閉液封閉1h；

9)加入抗BrdU一抗，4℃濕盒中孵育過夜；

10)TBS沖洗3次，每次5min；

11)加入二抗，37℃孵育30min；

12)TBS沖洗3次，每次5min；

13)加入DAPI，室溫2min；

14)TBS沖洗3次，每次5min；

15)防熒光淬滅劑封片，熒光顯微鏡觀察，拍照。

2.根據權利要求1所述的一種改進的GFP表達細胞的增殖檢測方法，其特征在于：所述培 養條件是指5％CO₂、飽和濕度、溫度37℃。

3.根據權利要求1所述的一種改進的GFP表達細胞的增殖檢測方法，其特征在于：所述 Hank’s液的pH在7.2～7.4，其中各物質的濃度為：5.4mmol/L?KCl，0.3mmol/LNa₂HPO₄， 0.4mmol/L?KH₂PO₄，4.2mmol/L?NaHCO₃，1.3mmol/L?CaCl₂，0.5mmol/L?MgCl₂，0.6mmol/L MgSO₄，137mmol/L?NaCl，5.6mmol/L?D-葡萄糖。

4.根據權利要求1所述的一種改進的GFP表達細胞的增殖檢測方法，其特征在于：所述TBS 的pH為7.6，其中各物質的濃度為：150mmol/L?NaCl，20mmol/L?Tris.Cl。