[發明專利]一種萊克多巴胺人工抗原的合成方法

無效

• 申請號: 200910016968.2
• 申請日: 2009-06-26
• 公開（公告）號: CN101597330A
• 公開（公告）日: 2009-12-09
• 發明（設計）人: 凌紅麗;孫海新;郗日沫
• 申請（專利權）人: 青島康地恩藥業有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/113
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司
• 代理人: 崔清晨

技術領域

本發明涉及一種β-興奮劑類藥物，尤其涉及一種萊克多巴胺(Ractopamine)人工抗原的合成方法。

背景技術

萊克多巴胺是一種β-興奮劑類藥物，與其他β-興奮劑類藥物如克倫特羅(Clenbuterol)、卡布特羅(carbuterol)、沙丁胺醇(salbutamol)等具有類似結構。眾所周知，β-興奮劑能夠影響營養物質在動物體內的流向和重新分配，能有效地促進肌肉組織生長，降低胴體脂肪含量，提高瘦肉率和增加瘦肉產量，因此在歐美地區曾被廣泛使用。但是，由于β-興奮劑具有類似腎上腺素的化學結構和作用機理，能與細胞表面的β-受體結合而引起諸如心悸、頭疼、目眩、惡心、嘔吐、戰栗、神經過敏、血管擴張、心率加快等生理作用，而且這類化合物具有口服活性，如果超量使用會對機體的肝腎等內臟器官產生一定的毒副作用，目前歐美各國均禁止其在畜牧生產上的應用，美國規定只能用于科研，我國農業部也嚴禁該類藥物作為添加劑使用。但是由于經濟利益的驅使，在畜牧生產中仍然存在違規使用現象，致使該類藥物在動物體內殘留，畜禽產品出口屢遭綠色壁壘，損害了我國出口產品的國際聲譽，影響了畜牧業的健康發展，給整個產業造成很大的經濟損失。為了應對該類藥物殘留給整個產業發展和食品安全保障所帶來的挑戰，我國政府加大了對藥物添加劑的檢測力度，修訂和頒布了更為嚴格的法律和規范。對畜產品生產過程進行監控和執法，一是制定最高殘留限量的標準，二是改進殘留分析方法和技術，發展快速、準確和高靈敏度的檢測手段。隨著對最常用的β-興奮劑—鹽酸克倫特羅檢測力度的加大，非法使用者開始使用其它代替品，萊克多巴胺與鹽酸克倫特羅的促生長作用相似，其在動物體內的消除時間比克倫特羅短，毒性較弱，因此，萊克多巴胺成為繼鹽酸克倫特羅之后的最主要的代替品之一。在當前的國際國內新形勢下，研究開發具有自主知識產權的萊克多巴胺的殘留檢測方法具有積極的現實意義。

在β-興奮劑藥物的殘留檢測中，酶聯免疫法(ELISA)基于抗原抗體反應和酶化學反應，具有靈敏、快速、特異性好、樣品需求量少，對昂貴儀器以及專業操作人員的依賴程度較低等優點，非常適于現場監控和樣品的批量檢測，而且酶聯免疫法的操作過程所需試劑大部分為無機化學試劑，且用量較少，因此該法屬于環境友好型檢測方法。但是萊克多巴胺屬于小分子化合物，這類化合物分子屬于半抗原，雖具有免疫反應性但是不具有免疫原性，欲對其進行免疫檢測分析必須把這些化合物與大分子的載體偶聯以形成既具有免疫原性又具有免疫反應性的全抗原，因此，合成β-興奮劑類藥物的全抗原就成為對其進行免疫檢測的關鍵技術。

發明內容

本發明的目的是提供一種萊克多巴胺人工抗原的合成方法，它能滿足現有技術的上述需求。

一種萊克多巴胺人工抗原的的制備方法，其特征在于先將萊克多巴胺與活化對氨基苯甲酸相聯，制備帶有羧基的萊克多巴胺活性中間體，再以乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺為交聯劑，將該萊克多巴胺活性中間體與載體蛋白上的氨基相偶聯，經透析及冷凍干燥，得萊克多巴胺人工抗原。

本發明的合成方法可以成功地把萊克多巴胺與載體蛋白偶聯起來，從而制備了能夠在動物體內引發免疫反應，產生抗體的完全免疫原—萊克多巴胺人工抗原。

附圖說明

附圖為萊克多巴胺人工抗原的紫外吸收光譜圖。圖中BSA為牛血清蛋白，RAC為萊克多巴胺，RAC-BSA為萊克多巴胺人工抗原。

具體實施方式

萊克多巴胺人工抗原的合成方法

(1)活化對氨基苯甲酸的制備：按摩爾比為1∶1的比例稱取亞硝酸鈉和對氨基苯甲酸，將亞硝酸鈉和對氨基苯甲酸分別溶在蒸餾水和0.2mol/L的鹽酸中，冰浴攪拌，將亞硝酸鈉的水溶液逐滴加入到對氨基苯甲酸的鹽酸溶液中，室溫避光反應1小時，得到無色的活化對氨基苯甲酸溶液。

本發明中所述的亞硝酸鈉和對氨基苯甲酸的摩爾比范圍為1～2∶1；所述鹽酸的濃度范圍為0.1～0.2mol/L，室溫避光反應時間范圍為0.5～1.5小時。

(2)萊克多巴胺活性中間體的制備：與活化對氨基苯甲酸的摩爾比為0.5∶1的比例稱取萊克多巴胺，溶在冰冷的硼砂緩沖溶液中(pH＝8.5～9.5，含0.15mol/L的氯化鈉)，冰浴攪拌，將活化對氨基苯甲酸溶液0.5～1.5ml逐滴加入到上述溶液中，室溫避光反應2～6小時，得到萊克多巴胺活性中間體溶液。

本發明中所述的萊克多巴胺與活化對氨基苯甲酸的摩爾比為0.5～2∶1；所述硼砂緩沖液中氯化鈉的濃度為0.14～0.15mol/L。