[發明專利]一種萊克多巴胺人工抗原的合成方法

無效

• 申請號: 200910016968.2
• 申請日: 2009-06-26
• 公開（公告）號: CN101597330A
• 公開（公告）日: 2009-12-09
• 發明（設計）人: 凌紅麗;孫海新;郗日沫
• 申請（專利權）人: 青島康地恩藥業有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/113
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司
• 代理人: 崔清晨

1.一種萊克多巴胺人工抗原的合成方法，其特征在于先將萊克多巴胺與活化對氨基苯甲酸相聯，以制備萊克多巴胺活性中間體，再以乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺為交聯劑，將該萊克多巴胺活性中間體與載體蛋白上的氨基相偶聯，經冷凍透析和干燥后得萊克多巴胺人工抗原。

2.如權利要求1所述萊克多巴胺人工抗原的合成方法，其特征在于制備所述活化對氨基苯甲酸時，按摩爾比為1～2∶1的比例稱取亞硝酸鈉和對氨基苯甲酸，將亞硝酸鈉和對氨基苯甲酸分別溶在蒸餾水和0.1～0.2mol/L的鹽酸中，冰浴攪拌，將亞硝酸鈉水溶液逐滴加入到對氨基苯甲酸的鹽酸溶液中，避光反應0.5～1.5小時。

3.如權利要求1所述萊克多巴胺人工抗原的合成方法，其特征在于制備所述的萊克多巴胺活性中間體時，按照與對氨基苯甲酸的摩爾比為0.5～2∶1的比例稱取萊克多巴胺，溶在冰冷的pH為8.5～9.5、含0.14～0.15mol/L氯化鈉的硼砂緩沖溶液中，冰浴攪拌，將活化的對氨基苯甲酸溶液0.5～1.5ml逐滴加入到該緩沖溶液中，室溫避光反應2～6小時。

4.如權利要求1所述萊克多巴胺人工抗原的合成方法，其特征在于所述的萊克多巴胺活性中間體與載體蛋白相偶聯時，向萊克多巴胺活性中間體溶液中加入硼酸晶體調pH至7.0～8.0，然后按載體蛋白與萊克多巴胺的摩爾比為1∶20～40的比例稱取載體蛋白加入萊克多巴胺活性中間體溶液中，使載體蛋白的終濃度為8-12mg/ml，然后再按萊克多巴胺與乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺、羥基琥珀酰亞胺的摩爾比為1∶7～10∶3～7的比例，室溫攪拌3～5小時。

5.如權利要求1所述萊克多巴胺人工抗原的合成方法，其特征在于所述的冷凍透析時，將萊克多巴胺與載體蛋白的偶聯物溶液轉移至透析袋中，以pH為7.30～7.50、濃度為0.01mol/L～0.02mol/L的磷酸緩沖液為透析外液，在0～4℃環境中攪拌透析70～80小時，然后改用蒸餾水為透析外液，在0～4℃環境中攪拌透析20～30小時，每5～7小時更換一次透析液。