[發明專利]蘇木素在測定細胞增殖活性和藥物對細胞毒效應中的應用

無效

• 申請號: 200910016250.3
• 申請日: 2009-06-23
• 公開（公告）號: CN101603068A
• 公開（公告）日: 2009-12-16
• 發明（設計）人: 張建華;王郡甫;陳紅
• 申請（專利權）人: 山東省醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/18
• 代理公司: 濟南圣達專利商標事務所有限公司
• 代理人: 楊 琪

1.蘇木素在測定細胞增殖活性和藥物對細胞毒效應中的應用，其特征在于：適用于貼壁細胞 Huvec或M21的細胞增殖活性的測定，測定方法為：取已稀釋好的Huvec或M21細胞的 待測細胞懸液，置于細胞培養板的各相應孔板中，每孔200μl，于37℃、體積分數為5％ 的CO2飽和濕度條件下，孵育44小時，甩棄上清，立即加入4％的多聚甲醛溶液，每孔 100μl，固定20分鐘后收集固定液，PBS洗3次，棄上清，室溫晾干；取蘇木素染色液， 每孔加入100μl，20分鐘后收集染色液，蒸餾水洗3～5次，以去除未結合的染料，室溫 晾干；于倒置顯微鏡下觀察細胞著色狀況，再加入1％的鹽酸酒精，100μl/孔，此時各孔 液體呈現不同程度的粉紅色，20分鐘內用酶標儀測定540nm處的吸光度值并記錄，取各 組OD值均數并繪制細胞系增殖曲線；

適用于藥物VCR、5-Fu、CDDP或金蕎麥提取物對貼壁腫瘤細胞M21、SGC7901或VX2的細 胞毒效應的測定，測定方法為：取經藥物VCR、5-Fu、CDDP或金蕎麥提取物處理的M21、 SGC7901或VX2細胞的待測細胞液，置于細胞培養板的孔板中，每孔200μl，同時設定無 藥物細胞對照和培養基酶標儀調零孔，于37℃、體積分數為5％的CO₂飽和濕度條件下， 孵育44小時；取出細胞培養板甩棄上清，立即加入4％的多聚甲醛溶液，150μl/孔，固定 20分鐘后收集固定液；PBS洗3次，棄上清，室溫晾干；取蘇木素染色液，每孔加入100 μl，20分鐘后收集染色液；蒸餾水洗3～5次以去除未結合的染料，室溫晾干；于倒置顯 微鏡下觀察細胞著色狀況，再加入1％的鹽酸酒精，100μl/孔，此時各孔液體呈現不同程 度的粉紅色，20分鐘內用酶標儀測定540nm處的吸光度值并記錄，按下式計算藥物的抑 瘤率：

抑制率(％)＝1-(實驗孔OD值/細胞對照孔OD值)×100％；

其中，實驗孔OD值表示實驗組各孔OD值的均數；細胞對照孔OD值表示無藥細胞對照 組各孔OD值的均數。

2.一種利用蘇木素測定貼壁細胞增殖活性的方法，其特征在于，步驟如下：取已稀釋好的 Huvec或M21細胞的待測細胞懸液，置于細胞培養板的各相應孔板中，每孔200μl，于 37℃、體積分數為5％的CO₂飽和濕度條件下，孵育44小時，甩棄上清，立即加入4％的 多聚甲醛溶液，每孔100μl，固定20分鐘后收集固定液，PBS洗3次，棄上清，室溫晾 干；取蘇木素染色液，每孔加入100μl，20分鐘后收集染色液，蒸餾水洗3～5次，以去 除未結合的染料，室溫晾干；于倒置顯微鏡下觀察細胞著色狀況，再加入1％的鹽酸酒精， 100μl/孔，此時各孔液體呈現不同程度的粉紅色，20分鐘內用酶標儀測定540nm處的吸 光度值并記錄，取各組OD值均數并繪制細胞系增殖曲線。

3.一種利用蘇木素測定藥物對腫瘤細胞系毒性作用的方法，其特征在于，步驟如下：取經藥 物VCR、5-Fu、CDDP或金蕎麥提取物處理的M21、SGC7901或VX2細胞的待測細胞液，置 于細胞培養板的孔板中，每孔200μl，同時設定無藥物細胞對照和培養基酶標儀調零孔， 于37℃、體積分數為5％的CO₂飽和濕度條件下，孵育44小時；取出細胞培養板甩棄上 清，立即加入4％的多聚甲醛溶液，150μl/孔，固定20分鐘后收集固定液；PBS洗3次， 棄上清，室溫晾干；取蘇木素染色液，每孔加入100μl，20分鐘后收集染色液；蒸餾水 洗3～5次以去除未結合的染料，室溫晾干；于倒置顯微鏡下觀察細胞著色狀況，再加入 1％的鹽酸酒精，100μl/孔，此時各孔液體呈現不同程度的粉紅色，20分鐘內用酶標儀測 定540nm處的吸光度值并記錄，按下式計算藥物的抑瘤率：

抑制率(％)＝1-(實驗孔OD值/細胞對照孔OD值)×100％；

其中，實驗孔OD值表示實驗組各孔OD值的均數；細胞對照孔OD值表示無藥細胞對照 組各孔OD值的均數。