[發明專利]一種分離芫花條化學成分的方法

有效

• 申請號: 200910015861.6
• 申請日: 2009-06-05
• 公開（公告）號: CN101575289A
• 公開（公告）日: 2009-11-11
• 發明（設計）人: 郭桂秋;姜永濤;徐貝貝;郗光建;翟勇;李欽剛;馬斐
• 申請（專利權）人: 山東魯泰環中制藥有限公司
• 主分類號: C07C69/30
• 分類號: C07C69/30;C07C69/80;C07C67/56;C07C53/126;C07C51/47;C07C69/732;C07D311/30;C07D311/40;C07D311/18;C07D493/04;C07J17/00;C07H15/203;C07H15/2
• 代理公司: 青島發思特專利商標代理有限公司
• 代理人: 蔡紹強

技術領域

本發明屬于藥用植物化學成分的分離，具體涉及一種分離芫花條化學成分的方法。

背景技術

芫花(Daphne?genkwa?Sieb.et?Zucc)為瑞香科植物，廣泛分布于我國長江流域各省和黃河 流域的部分地區。芫花干燥的花蕾具有“瀉水逐飲，解毒殺蟲”之功^[1]。目前對芫花的研究 主要集中在干芫花花蕾和芫花根上，且分離所得主要是香豆素、芫花萜、黃酮類化合物。由 芫花枝條的提取物制備的“消絡痛片(或膠囊)”用于治療風濕性關節炎，臨床使用多年且效 果較好，但其所含成分及活性成分并不清楚。

發明內容

本發明的目的是通過研究芫花枝條的主要成分，并希望從中能夠得到藥理活性較強的化 合物。

本發明是通過如下技術方案實施的：

研究一種分離芫花條化學成分的方法，其特征是用硅膠柱色譜法對瑞香科植物芫花 (Daphne?genkwa?Sieb.et?Zucc.)的枝條乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁 醇深度萃取，進行化學成分的分離，該方法分作如下步驟：

(1)制備芫花枝條乙醇提取物

重量比例：芫花枝條∶乙醇＝1∶1～2

干燥芫花枝條，常規凈制、切段；乙醇含量為95±5％；

室溫下滲漉法提取3～4次，合并滲漉液，50～55℃濃縮至稠膏狀得浸膏；

(2)制備乙醇提取物的溶劑萃取物

將上述芫花枝條浸膏均勻混懸于水中，芫花枝條浸膏混懸液，先后分別用石油醚、乙酸 乙酯和水飽和的正丁醇萃取；

①石油醚萃取

配量：固液比為芫花枝條浸膏重量∶石油醚體積＝1∶10～14

每次萃取時，混懸液加配量的石油醚，室溫下攪拌3h，分離萃取石油醚層；反復萃取3 次，合并石油醚萃取液；備用；

石油醚萃取液進行硅膠柱層析：硅膠柱高120cm，柱徑10cm，柱溫室溫；環己烷-乙酸 乙酯梯度洗脫，梯度范圍，環己烷-乙酸乙酯在起始液和終止液中的濃度分別是：100％∶0％ →50％∶50％，得到I～XV共15個部分；

a.將第III部分過小硅膠柱，小硅膠柱200～300目，柱徑2.5cm，柱高45cm，柱溫室溫， 環己烷-乙酸乙酯梯度洗脫，梯度范圍，環己烷-乙酸乙酯在起始液和終止液中的濃度分別 是：100％∶0％→50％∶50％，得到化合物1，3和4；

b.將第V部分過小硅膠柱，小硅膠柱200～300目，硅膠柱高45cm，柱徑2.5cm，柱溫 室溫，環己烷-乙酸乙酯梯度洗脫，梯度范圍，環己烷-乙酸乙酯在起始液和終止液中的濃 度分別是：100％∶0％→50％∶50％；

環己烷∶乙酸乙酯＝80％∶20％時，得到無色油狀液體為化合物2；

環己烷∶乙酸乙酯＝75％∶25％時，根據極性的不同，依次得白色粉末為化合物5和6；

②乙酸乙酯萃取

配量：固液比為芫花枝條浸膏重量∶乙酸乙酯體積＝1∶6～10

每次萃取時，混懸液加配量的乙酸乙酯，室溫下攪拌3h，分離萃取乙酸乙酯層，反復 萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液；備用；

乙酸乙酯萃取液進行硅膠柱層析：硅膠柱高120cm，柱徑10cm，柱溫室溫；氯仿-甲醇 梯度洗脫，梯度范圍，氯仿-甲醇在起始液和終止液中的濃度分別是：100％∶0％→85％∶15％；

氯仿∶甲醇＝100％∶85％時得到I～XX共20個部分；

a.將第II部分過小硅膠柱，小硅膠柱200～300目，柱徑2.5cm，柱高45cm，柱溫室溫， 以環己烷-丙酮梯度洗脫，梯度范圍，環己烷-丙酮在起始液和終止液中的濃度分別是： 100％∶0％→60％∶40％；

環己烷∶丙酮＝60％∶40％時，所得洗脫液經進一步Sephadex?LH-20凝膠柱色譜進行純化， 經丙酮重結晶得化合物7；

b.將第IV部分過小硅膠柱，硅膠柱200～300目，柱徑2.5cm，柱高45cm，柱溫室溫， 以氯仿-甲醇梯度洗脫，梯度范圍，氯仿-甲醇在起始液和終止液中的濃度分別是：100％∶ 0％→85％∶15％；

氯仿∶甲醇＝90％∶10％時，洗脫部分析出晶體，經重結晶得化合物8；