[發(fā)明專利]一種分離芫花條化學(xué)成分的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910015861.6
• 申請(qǐng)日: 2009-06-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101575289A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭桂秋;姜永濤;徐貝貝;郗光建;翟勇;李欽剛;馬斐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東魯泰環(huán)中制藥有限公司
• 主分類號(hào): C07C69/30
• 分類號(hào): C07C69/30;C07C69/80;C07C67/56;C07C53/126;C07C51/47;C07C69/732;C07D311/30;C07D311/40;C07D311/18;C07D493/04;C07J17/00;C07H15/203;C07H15/2
• 代理公司: 青島發(fā)思特專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 蔡紹強(qiáng)

1.一種分離芫花條化學(xué)成分的方法，其特征是用硅膠柱色譜法對(duì)瑞香科植物芫花Daphne? genkwa?Sieb.et?Zucc.枝條的乙醇提取物經(jīng)石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇深度萃取，進(jìn) 行化學(xué)成分的分離，該方法分作如下步驟：

⑴制備芫花枝條乙醇提取物

重量比例：芫花枝條∶乙醇=1∶1～2

干燥芫花枝條，常規(guī)凈制、切段；乙醇含量為95±5%；

室溫下滲漉法提取3～4次,合并滲漉液，50～55℃濃縮至稠膏狀得浸膏；

⑵制備乙醇提取物的溶劑萃取物

將上述芫花枝條浸膏均勻混懸于水中,芫花枝條浸膏混懸液，先后分別用石油醚、乙酸 乙酯和水飽和的正丁醇萃取；

①石油醚萃取

配量：固液比為芫花枝條浸膏重量∶石油醚體積=1∶10～14

每次萃取時(shí)，混懸液加配量的石油醚，室溫下攪拌3h，分離萃取石油醚層；反復(fù)萃取3 次，合并石油醚萃取液；備用；

石油醚萃取液進(jìn)行硅膠柱層析：硅膠柱高120cm，柱徑10cm，柱溫室溫；環(huán)己烷—乙酸 乙酯梯度洗脫,梯度范圍，環(huán)己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%，得到I～XV共15個(gè) 部分；

a.將第III部分過(guò)小硅膠柱，硅膠200～300目，柱徑2.5cm，柱高45cm，柱溫室溫，環(huán) 己烷—乙酸乙酯梯度洗脫，梯度范圍，環(huán)己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%,得到化合 物1，十八碳酸單甘油酯、化合物3，棕櫚酸和化合物4，β-谷甾醇；

b.將第V部分過(guò)小硅膠柱，硅膠200～300目，硅膠柱高45cm，柱徑2.5cm，柱溫室溫,環(huán) 己烷—乙酸乙酯梯度洗脫，梯度范圍，環(huán)己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%；

環(huán)己烷∶乙酸乙酯=80%∶20%時(shí),得到無(wú)色油狀液體為化合物2，鄰苯二甲酸二丁酯；

環(huán)己烷∶乙酸乙酯=75%∶25%時(shí),根據(jù)極性的不同，依次得白色粉末為化合物5，咖啡 酸十八烷酯和化合物6，咖啡酸正二十烷酯；

②乙酸乙酯萃取

配量：固液比為芫花枝條浸膏重量∶乙酸乙酯體積=1∶6～10

每次萃取時(shí)，混懸液加配量的乙酸乙酯，室溫下攪拌3h，分離萃取乙酸乙酯層，反復(fù)萃 取3次，合并乙酸乙酯萃取液；備用；

乙酸乙酯萃取液進(jìn)行硅膠柱層析：硅膠柱高120cm，柱徑10cm，柱溫室溫；氯仿—甲醇 梯度洗脫，梯度范圍，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；得到I～XX共20個(gè)部分；

a.將第II部分過(guò)小硅膠柱，硅膠200～300目，柱徑2.5cm，柱高45cm，柱溫室溫，以環(huán) 己烷—丙酮梯度洗脫，梯度范圍，環(huán)己烷—丙酮100%∶0%→60%∶40%；

環(huán)己烷∶丙酮=60%∶40%時(shí)，所得洗脫液經(jīng)進(jìn)一步Sephadex?LH-20凝膠柱色譜進(jìn)行純 化，經(jīng)丙酮重結(jié)晶得化合物7，山奈酚；

b.將第IV部分過(guò)小硅膠柱，硅膠200～300目，柱徑2.5cm，柱高45cm，柱溫室溫，以 氯仿—甲醇梯度洗脫，梯度范圍，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=90%∶10%時(shí)，洗脫部分析出晶體，經(jīng)重結(jié)晶得化合物8，西瑞香素；

c.將第V部分過(guò)小硅膠柱，硅膠200～300目，硅膠柱高45cm，柱徑2.5cm，柱溫室溫, 氯仿—甲醇梯度洗脫，梯度范圍，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=93%∶7%時(shí),將洗脫液濃縮，丙酮溶解，靜置24h析出晶體得化合物10， 紫丁香樹(shù)脂醇；

然后再用100%甲醇將第V部分全部洗脫下來(lái)，濃縮、丙酮溶解，靜置24h，析出晶體為 化合物11，木犀草素；

d.將第X部分過(guò)小硅膠柱，硅膠200～300目，硅膠柱柱高45cm，柱徑2.5cm，柱溫室 溫,氯仿—甲醇梯度洗脫，梯度范圍，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=85%∶15%時(shí)，洗脫液析出晶體，經(jīng)甲醇重結(jié)晶得化合物12，β-胡蘿卜苷；

③水飽和的正丁醇萃取

配量：固液比為芫花枝條浸膏重量∶水飽和的正丁醇體積=1∶10～30；

每次萃取時(shí)，混懸液加芫花枝條浸膏9～10倍量水飽和的正丁醇，室溫下攪拌3h；反復(fù) 萃取3次，合并水飽和的正丁醇萃取液；備用；

水飽和的正丁醇萃取液進(jìn)行硅膠柱層析：硅膠柱高120cm，柱徑10cm，柱溫室溫；氯仿 —甲醇梯度洗脫,梯度范圍，氯仿—甲醇100%:0%→60%:40%，得到I～X?10個(gè)部分；

將第V部分過(guò)小硅膠柱，硅膠200～300目，硅膠柱柱高45cm，柱徑2.5cm，柱溫室溫， 氯仿—甲醇梯度洗脫；梯度范圍，氯仿—甲醇100%:0%→60%:40%；

氯仿∶甲醇=93%∶7%時(shí)，得化合物13，刺五加苷B；

氯仿∶甲醇=90%∶10%時(shí)，得化合物14，松脂醇二葡萄糖苷；

氯仿∶甲醇=92%∶8%時(shí)，得化合物15，二氫刺五加苷B。

1.一種分離芫花條化學(xué)成分的方法，其特征是用硅膠柱色譜法對(duì)瑞香科植物芫花Daphne? genkwa?Sieb.et?Zucc.枝條的乙醇提取物經(jīng)石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇深度萃取，進(jìn) 行化學(xué)成分的分離，該方法分作如下步驟：

⑴制備芫花枝條乙醇提取物

重量比例：芫花枝條∶乙醇=1∶1～2

干燥芫花枝條，常規(guī)凈制、切段；乙醇含量為95±5%；

室溫下滲漉法提取3～4次,合并滲漉液，50～55℃濃縮至稠膏狀得浸膏；

⑵制備乙醇提取物的溶劑萃取物

將上述芫花枝條浸膏均勻混懸于水中,芫花枝條浸膏混懸液，先后分別用石油醚、乙酸 乙酯和水飽和的正丁醇萃取；

①石油醚萃取

配量：固液比為芫花枝條浸膏重量∶石油醚體積=1∶10～14

每次萃取時(shí)，混懸液加配量的石油醚，室溫下攪拌3h，分離萃取石油醚層；反復(fù)萃取3 次，合并石油醚萃取液；備用；

石油醚萃取液進(jìn)行硅膠柱層析：硅膠柱高120cm，柱徑10cm，柱溫室溫；環(huán)己烷—乙酸 乙酯梯度洗脫,梯度范圍，環(huán)己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%，得到I～XV共15個(gè) 部分；

己烷—乙酸乙酯梯度洗脫，梯度范圍，環(huán)己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%,得到化合 物1，十八碳酸單甘油酯、化合物3，棕櫚酸和化合物4，β-谷甾醇；

己烷—乙酸乙酯梯度洗脫，梯度范圍，環(huán)己烷—乙酸乙酯100%∶0%→50%∶50%；

環(huán)己烷∶乙酸乙酯=80%∶20%時(shí),得到無(wú)色油狀液體為化合物2，鄰苯二甲酸二丁酯；

環(huán)己烷∶乙酸乙酯=75%∶25%時(shí),根據(jù)極性的不同，依次得白色粉末為化合物5，咖啡 酸十八烷酯和化合物6，咖啡酸正二十烷酯；

②乙酸乙酯萃取

配量：固液比為芫花枝條浸膏重量∶乙酸乙酯體積=1∶6～10

每次萃取時(shí)，混懸液加配量的乙酸乙酯，室溫下攪拌3h，分離萃取乙酸乙酯層，反復(fù)萃 取3次，合并乙酸乙酯萃取液；備用；

乙酸乙酯萃取液進(jìn)行硅膠柱層析：硅膠柱高120cm，柱徑10cm，柱溫室溫；氯仿—甲醇 化，經(jīng)丙酮重結(jié)晶得化合物7，山奈酚；

氯仿—甲醇梯度洗脫，梯度范圍，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=90%∶10%時(shí)，洗脫部分析出晶體，經(jīng)重結(jié)晶得化合物8，西瑞香素；

氯仿—甲醇梯度洗脫，梯度范圍，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=93%∶7%時(shí),將洗脫液濃縮，丙酮溶解，靜置24h析出晶體得化合物10， 紫丁香樹(shù)脂醇；

然后再用100%甲醇將第V部分全部洗脫下來(lái)，濃縮、丙酮溶解，靜置24h，析出晶體為 化合物11，木犀草素；

溫,氯仿—甲醇梯度洗脫，梯度范圍，氯仿—甲醇100%∶0%→85%∶15%；

氯仿∶甲醇=85%∶15%時(shí)，洗脫液析出晶體，經(jīng)甲醇重結(jié)晶得化合物12，β-胡蘿卜苷；

③水飽和的正丁醇萃取

配量：固液比為芫花枝條浸膏重量∶水飽和的正丁醇體積=1∶10～30；

每次萃取時(shí)，混懸液加芫花枝條浸膏9～10倍量水飽和的正丁醇，室溫下攪拌3h；反復(fù) 萃取3次，合并水飽和的正丁醇萃取液；備用；

水飽和的正丁醇萃取液進(jìn)行硅膠柱層析：硅膠柱高120cm，柱徑10cm，柱溫室溫；氯仿 —甲醇梯度洗脫,梯度范圍，氯仿—甲醇100%:0%→60%:40%，得到I～X?10個(gè)部分；

氯仿—甲醇梯度洗脫；梯度范圍，氯仿—甲醇100%:0%→60%:40%；

氯仿∶甲醇=93%∶7%時(shí)，得化合物13，刺五加苷B；

氯仿∶甲醇=90%∶10%時(shí)，得化合物14，松脂醇二葡萄糖苷；