[發明專利]三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱及制備方法和應用

無效

• 申請號: 200910014658.7
• 申請日: 2009-03-01
• 公開（公告）號: CN101513577A
• 公開（公告）日: 2009-08-26
• 發明（設計）人: 楊黃浩;周文輝;郭秀春;林黎明;王小如
• 申請（專利權）人: 國家海洋局第一海洋研究所
• 主分類號: B01D15/22
• 分類號: B01D15/22;B01J20/285;B01J20/30
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司
• 代理人: 張中南

技術領域

本發明涉及分析化學、食品安全領域，具體地說，是涉及三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱及制備方法和應用，并主要用于奶制品中三聚氰胺殘留的高選擇性分離、富集和純化。

背景技術

三聚氰胺(melamine)，是一種三嗪類含氮雜環有機化合物，重要的氮雜環有機化工原料，簡稱三胺，俗稱蜜胺、蛋白精。由于我國采用估測食品和飼料工業蛋白質含量的方法，導致不法商人將三聚氰胺摻雜在食品或飼料中，以提升食品或飼料檢測中的蛋白質含量指標。作為一種常見的化工原料，三聚氰胺被認為毒性輕微，但是長期攝入三聚氰胺會造成生殖、泌尿系統的損害，膀胱、腎部結石，并可進一步誘發膀胱癌。2007年，美國爆發寵物食品受污染事件，事后調查表明：摻雜了≤6.6％三聚氰胺的小麥蛋白粉是寵物食品導致中毒的原因。2008年9月，中國爆發三鹿嬰幼兒奶粉受污染事件，導致食用了受污染奶粉的嬰幼兒產生腎結石病癥，其原因也是奶粉中含有三聚氰胺。2008年10月8日，衛生部、工業和信息化部、農業部、國家工商行政管理總局和國家質量監督檢驗檢疫總局聯合發布公告，制定三聚氰胺在乳與乳制品中的臨時管理值：嬰幼兒配方乳粉中三聚氰胺的限量值為1mg/kg，液態奶(包括原料乳)、奶粉、其它配方乳粉中三聚氰胺的限量值為2.5mg/kg，含乳15％以上的其它食品中三聚氰胺的限量值為2.5mg/kg，高于限量值的產品一律不得銷售。目前，對于奶制品中三聚氰胺殘留含量的檢測是一個及其復雜的過程，由于奶制品中基質非常復雜，樣品的前處理過程非常重要。用固相萃取法對奶制品中的三聚氰胺進行預處理，方法簡單、方便、快捷。但是，現有固相萃取小柱均是一次性使用，價格昂貴；三聚氰胺屬于強極性化合物，在傳統的C₁₈固相萃取小柱上的保留很差；而離子交換固相萃取小柱不能很好地分離三聚氰胺與奶制品中的內源性小分子成分的干擾。同時，普通固相萃取方法預處理的樣品由于背景依然較為復雜，必須結合氣相質譜聯用儀、液相質譜聯用儀等，需要專業人員操作，檢測費用高昂，無法在常規檢測中進行普及。

發明內容

本發明目的在于克服現有技術的不足，提供一種三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱及制備方法和應用，以方便、快捷、高效地選擇性純化和富集奶粉、牛奶等奶制品提取液中的三聚氰胺殘留，結合高效液相色譜即可實現奶制品中三聚氰胺快速的分析，便于在例行分析檢測中普及與推廣。

本發明是通過以下技術方案實現的：

三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱，其特征是內底有一石英砂篩板的玻璃小柱中填充有三聚氰胺分子印跡聚合物顆粒。

本發明中三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)首先制備含有三聚氰胺的分子印跡聚合物顆粒：

將三聚氰胺、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基雙丙烯酸酯按照1∶6～18∶30～100的比例超聲分散于甲醇或者乙醇的水溶液中，在30～80度條件下攪拌過夜；加入偶氮二異丁腈之后，氮吹除氧10分鐘密封反應器，在氮氣保護下油浴60度反應24小時，得到塊狀分子印跡聚合物；將塊狀分子印跡聚合物用研缽磨碎，過100～1000目篩，得到大小為150～13微米且含有三聚氰胺的分子印跡聚合物顆粒；

(2)將上述含有三聚氰胺的分子印跡聚合物顆粒置于含10％乙酸的甲醇溶液中，在索氏提取器中提取48小時以除去三聚氰胺及未反應的化合物；再經丙酮洗滌并反復沉降，濾去丙酮，將獲得的沉淀顆粒物真空干燥至恒重，即為三聚氰胺分子印跡聚合物顆粒；

(3)最后制備三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱：

稱取50～1000mg上述三聚氰胺分子印跡聚合物顆粒，以乙腈為勻漿液填充于底端為石英砂篩板的1～5mL玻璃小柱內，自然涼干或氮氣吹干玻璃小柱制得三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱。

以上步驟所述試劑中，三聚氰胺、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基雙丙烯酸酯購自Sigma公司，甲醇、乙腈購自Merck公司。

本發明中所述的三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱應用于奶制品中三聚氰胺殘留樣品提取液的高選擇性分離、富集、純化，其特征包括以下步驟：

(1)將上述三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱依次用水1～10mL、甲醇1～10mL活化，最終用氮氣吹干備用；

(2)奶制品三聚氰胺提取液1～5mL滴加至三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱，以0.1～0.5mL/min的速度過固相萃取小柱，并用氮氣吹干固相萃取小柱；

(3)依次用去離子水1～10mL和甲醇1～10mL淋洗固相萃取小柱，流速為0.1～0.5mL/min，并用氮氣吹干固相萃取小柱；