[發明專利]銀屑病基礎研究模型的建立方法及氣液平面跨膜裝置

無效

• 申請號: 200910011891.X
• 申請日: 2009-06-05
• 公開（公告）號: CN101570739A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發明（設計）人: 劉曉明;王曼姬
• 申請（專利權）人: 劉曉明
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08;C12M3/02;C12Q1/02
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司
• 代理人: 李 猛

1.一種銀屑病基礎研究模型的建立方法，其特征在于是按照下述步驟建立：

（1）取材：

①皮膚標本：半年內未經治療尋常性銀屑病皮損；

②銀屑病外周血：相應銀屑病患者外周血2mL；

③β-溶血性鏈球菌；

（2）材料處理及運輸

將大小約1.5cm×1.5cm的未經治療尋常性銀屑病皮損,除去皮脂及部分真 皮，放入含青霉素+鏈霉素溶液體積比含量占總體積10%的William’s培養基 200μl的1.5mL離心管，4℃、30min內運至實驗室；血樣37℃、30min內運至 實驗室；

（3）T淋巴細胞分離

將相應的銀屑病患者外周血2mL,與PBS?1：1體積比混勻，小心加于4mL淋 巴細胞分離液上，1500轉/分離心20min，取上數第二層環狀乳白色淋巴細胞層， PBS洗滌兩次，24孔板培養，利用粘附貼壁分離法，去除單核細胞和部分B淋巴 細胞，收集懸浮細胞，密度10⁶個/mL于William’s培養基培養；

（4）β-溶血性鏈球菌抗原制備

將β-溶血性鏈球菌于哥倫比亞血平板中37℃培養24小時，平板菌落計數法 計數，密度10⁹個/mL，培養液12?000轉/分離心,菌體沉淀收集后置雙蒸水中, 冰浴,40W×8分三次超聲打散沉淀液細菌,25?000轉/分離心收集散菌菌體沉淀, 稱重，-20℃保存備用；

（5）簡易皮膚組織氣液培養模型制備

無菌六孔板，每孔滴入2mL?William’s培養基，內含銀屑病外周血T細胞 密度約10⁵個/ml及β-溶血性鏈球菌抗原密度約10⁶個/ml，放置經滅菌處理的直 徑為2cm圓形擦鏡紙浮于其上；

（6）皮塊處理

在超凈臺內將皮損均勻切成3mm×3mm皮塊，用含10%雙抗溶液的PBS洗滌3 次，每次2min，輕放于準備好的培養裝置的承載面上，表皮暴露于空氣中， 真皮處于液相中，加入步驟（3）中所制備的銀屑病外周血T淋巴細胞,使其 在2mL?William’s培養基中密度達10⁵個/ml；步驟（4）中所制備的β-溶血性 鏈球菌抗原，使其在培養液中密度達10⁶個/ml，于37℃，CO₂飽和度為5%孵育箱 中培養，48～72小時換液。

2.根據權利要求1所述的銀屑病基礎研究模型的建立方法，其特征在于： 步驟（2）中所述的未經治療尋常性銀屑病皮損，是在無菌操作下取得的。

3.一種用于銀屑病體外皮損培養的氣液平面跨膜裝置，包括含銀屑病外周 血T細胞和溶血性鏈球菌抗原的無血清培養基，以及浮于培養基液面上承載組織 塊的滅菌擦鏡紙；其中，組織塊真皮處于液相中，表皮暴露于氣相中，氣相環境 為37℃，CO₂飽和度為5%。