[發明專利]一種以氯嘧磺隆為底物的混菌降解菌劑的篩選方法

無效

• 申請號: 200910010877.8
• 申請日: 2009-03-25
• 公開（公告）號: CN101845393A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 張惠文;張曉黎;蔡穎慧;李旭;李新宇;蘇振成
• 申請（專利權）人: 中國科學院沈陽應用生態研究所
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C12Q1/04;A62D3/02;A62D101/28;A62D101/04;C12R1/00
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 許宗富;周秀梅

1.一種以氯嘧磺隆為底物的混菌降解菌劑的篩選方法，其特征在于：取土壤菌懸液，在1/5LB培養基中添加氯嘧磺隆濃度為100mg/L，按照體積百分比5-10％的接種量接種菌懸液，28-30℃，150-180r/min搖床培養5-7天，按體積百分比5-10％的接種量將培養液接種于新的1/5LB培養基，氯嘧磺隆的濃度按100mg/L遞增，依次類推，5次轉接后，培養基中氯嘧磺隆濃度為500mg/L，再按體積比5-10％的接種量轉接5次，氯嘧磺隆的添加濃度始終為500mg/L，得到富集的混菌菌種，液相色譜法測得該混菌菌種對培養基中氯嘧磺隆的降解率達到70％以上，將上述菌種發酵擴大培養經處理后，即得到以氯嘧磺隆為底物的混菌降解菌劑。

2.根據權利要求1所述的以氯嘧磺隆為底物的混菌降解菌劑的篩選方法，其特征在于：所述的1/5LB培養基的配方為：胰蛋白胨2g，酵母粉1g，氯化鈉2g，蒸餾水1000ml?pH＝7.0。

3.根據權利要求1所述的以氯嘧磺隆為底物的混菌降解菌劑的篩選方法，其特征在于：液相色譜法測降解率的條件為，C₁₈反相柱(4.6um×250mm)，DAD二級管陣列檢測器，流動相為甲醇、水和冰醋酸，其體積比為：70∶30∶0.1；流速為1ml/min；檢測波長為254nm；柱溫為28-30℃；進樣量為5-10μl。

4.根據權利要求1所述的以氯嘧磺隆為底物的混菌降解菌劑的篩選方法，其特征在于：所述發酵培養為，富集得到的混菌菌種，在1/5LB培養基中，進行發酵擴大培養，發酵結束后菌體數量達到10億個/mL以上，用麥麩和泥炭在40-50℃下吸附風干粉碎，即得到以氯嘧磺隆為底物的混菌降解菌劑。

5.根據權利要求4所述的以氯嘧磺隆為底物的混菌降解菌劑的篩選方法，其特征在于：擴大培養，發酵罐的條件為；無菌空氣的通氣量為1∶0.8-1，攪拌速度為180-200r/min，培養溫度為28-30℃，培養時間為48-60h。

6.根據權利要求4所述的以氯嘧磺隆為底物的混菌降解菌劑的篩選方法，其特征在于：二級發酵結束后菌體數量達到10億個/ml以上，用質量比2∶8-1∶9的麥麩和泥炭吸附，在40-50℃下吸附風干粉碎。