[發(fā)明專利]一株兼性厭氧海洋施氏假單胞菌的活性提取物及其制法和用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910010499.3
• 申請日: 2009-02-26
• 公開（公告）號: CN101496820A
• 公開（公告）日: 2009-08-05
• 發(fā)明（設計）人: 穆軍;顧曉潔;張翼;付步飛;董學偉
• 申請（專利權）人: 大連交通大學
• 主分類號: A61K35/74
• 分類號: A61K35/74;A61P31/04;C12P1/04
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司
• 代理人: 賈漢生

技術領域

本發(fā)明涉及來源于細菌的醫(yī)藥配制品，特別是來源于一株兼性厭氧海洋反 硝化細菌培養(yǎng)物的活性提取物及其制法。

背景技術

海洋微生物來源的新藥開發(fā)是二十一世紀世界范圍的研究熱點問題，以其 新菌種來源、產(chǎn)生新結構活性物質、克服傳統(tǒng)抗生素耐藥性以及實現(xiàn)資源可持 續(xù)等特點而為人們所普遍關注。目前已經(jīng)從各類海洋微生物中分離到許多結構 新穎的抗細菌抗生素、抗真菌抗生素、抗病毒抗生素、抗腫瘤抗生素以及一些 抗炎癥和鎮(zhèn)痛的活性物質、酶抑制劑等。但目前新型生命活性物質的研發(fā)對象 主要集中于易于研究的海洋好氧微生物，有大量報道從海洋好氧微生物中分離 到新的藥理活性成分。由于海水的物理阻隔作用，中下層海水中存在大量的兼 性厭氧細菌和嚴格厭氧細菌，至今稀見有從這些類型細菌中分離到活性成分的 報道。海水中的反硝化細菌屬于兼性厭氧的細菌類群，這類微生物在好氧培養(yǎng) 條件下進行有氧呼吸，在缺氧培養(yǎng)條件下進行硝酸鹽呼吸，在其硝酸鹽呼吸代 謝途徑中產(chǎn)生了許多不同于有氧呼吸的次級代謝產(chǎn)物，但迄今尚未見有報道從 海洋反硝化細菌類群在缺氧培養(yǎng)物中分離提取到具有藥理活性的組分。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種反硝化細菌海洋菌株培養(yǎng)液的活性提取物。

本發(fā)明的另一個目的是提供了該活性提取物的分離方法。

本發(fā)明進一步的目的是提供了該活性提取物在制備抗細菌藥物中的應用。

本發(fā)明涉及的一株兼性厭氧海洋細菌DN7是從中國渤海海域的海洋底泥 中分離獲得。該菌株合適的生長鹽濃度范圍為2.0%～5.0%；對銅綠假單胞菌和 枯草芽孢桿菌有抗性。依據(jù)《Bergy’s?manual?of?systematical?bacteriology》(vol.1. The?Williams?and?wilkins?Co.Baltimore.1984),經(jīng)鑒定為施氏假單胞菌 Pseudomonas?stuszeri，已于2008年10月30日保藏在中國微生物菌種保藏管 理委員會普通微生物中心（其簡稱為CGMCC），保藏單位地址：北京市朝陽 區(qū)大屯路，中國科學院微生物研究所。保藏編號為：CGMCC?No.2732。

海洋菌株DN7具有下述性質：革蘭染色為陰性菌。短桿狀，寬 0.3μm～0.5μm，長1.0μm～1.5μm，無鞭毛。在有氧培養(yǎng)條件下進行氧呼吸，菌 落為褐色，表面光滑，較粘稠，邊緣規(guī)則；在缺氧培養(yǎng)條件下進行硝酸鹽呼吸， 產(chǎn)氣，每一菌落將包圍的營養(yǎng)瓊脂脹裂，液體培養(yǎng)基中則產(chǎn)生連續(xù)而均勻的細 小氣泡。最佳生長溫度范圍35～37℃，最佳生長pH為7.2～7.4。對有機碳源的 利用情況如下：在（1）乙酸鹽，（2）酒石酸鉀鈉,（3）淀粉等條件下生長良好。 海洋菌株DN7在缺氧培養(yǎng)條件下可產(chǎn)生抗菌活性物質，而在有氧培養(yǎng)條件下 則檢測不到抗菌活性物質的產(chǎn)生。

海洋菌株DN7的16S?rDNA序列（1451bp）已向美國國家生物技術信息中心 （NCBI）的GenBank基因序列數(shù)據(jù)庫提交，登陸號為EU873348。其全序列如下：