[發明專利]一種高靈敏度的利用基因突變酵母細胞篩選抗朊病毒藥物的方法有效
| 申請號： | 200910010219.9 | 申請日： | 2009-01-21 |
| 公開（公告）號： | CN101481729A | 公開（公告）日： | 2009-07-15 |
| 發明（設計）人： | 宋有濤;宋堯;李輝 | 申請（專利權）人： | 遼寧大學 |
| 主分類號： | C12Q1/18 | 分類號： | C12Q1/18;C12R1/865 |
| 代理公司： | 沈陽杰克知識產權代理有限公司 | 代理人： | 楊 華 |
| 地址： | 110036遼寧省沈*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 靈敏度 利用 基因突變 酵母 細胞 篩選 病毒 藥物 方法 | ||
1.一種高靈敏度的利用基因突變酵母細胞篩選抗朊病毒藥物的方法，其特征在于步驟如下：
1）SSA1-YS1酵母細胞的制備：
將野生型釀酒酵母細胞（Saccharomyces?cerevisiae）內的分子伴侶SSA1基因編碼的第483位亮氨酸突變為色氨酸，得到基因突變型SSA1-YS1酵母細胞，其菌落顏色為粉色；
2）篩選抗朊病毒藥物：
SSA1-YS1酵母細胞的活化：取SSA1-YS1酵母細胞接入1/2YPD培養液中，30℃振蕩過夜培養；
SSA1-YS1酵母細胞初始OD值的調試：調制SSA1-YS1酵母細胞懸液OD600=0.5；
篩選待測藥物：取無菌凍存管，分別加入待測藥物、1/2YPD培養液以及調試好的SSA1-YS1酵母細胞懸液，在24℃的條件下，振蕩培養，每天定時取前一天凍存管中的SSA1-YS1酵母細胞放入新的裝有1/2YPD培養液和待測藥物的無菌凍存管中，振蕩培養1~5天；
檢測：從第一天起，隔天提取100μl前一天的凍存管中的SSA1-YS1酵母細胞懸液，稀釋后，在1/2YPD固體培養基的培養皿上涂布；將涂好SSA1-YS1酵母細胞懸液的培養皿置于24℃恒溫培養箱中培養3天，再轉入4℃冰箱中培養7天，觀察SSA1-YS1酵母細胞的顏色；
標準：SSA1-YS1酵母細胞為紅色表示該待測藥物具有抗朊病毒的作用，SSA1-YS1酵母細胞仍為粉色表示該待測藥物對于朊病毒無作用；
其中，所述的待測藥物是鹽酸胍或菲啶。
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