[發明專利]一種耐熱非-K12大腸桿菌植酸酶及其生產

有效

• 申請號: 200880131973.1
• 申請日: 2008-11-14
• 公開（公告）號: CN102209785A
• 公開（公告）日: 2011-10-05
• 發明（設計）人: 葉秀云;李仁寬;靳偉剛;陳彩芳
• 申請（專利權）人: 福建福大百特科技發展有限公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/63;C12N9/16
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

1.一個分離的核酸分子，其含有一個選自以下組中的核苷酸序列：

(a)一個核苷酸序列，其編碼如SEQ?ID?NO：3所示氨基酸序列的多肽；

(b)一個在嚴格雜交條件下與(a)雜交的核苷酸序列，其所述核苷酸序列編碼具有非-K12大腸桿菌植酸酶活性的多肽；或

(c)一個與(a)或(b)互補的核苷酸序列。

2.如權利要求1所述的分離的核酸分子，其含有一個選自以下組中的核苷酸序列：

(a)一個由如SEQ?ID?NO：1中所示第67-1296位核苷酸所組成的核素序列；

(b)一個由如SEQ?ID?NO：2中所示第1-1230位核苷酸所組成的核素序列；

(c)一個如SEQ?ID?NO：1所示的核酸序列；

(d)一個在嚴格雜交條件下與(a)至(c)中任一個雜交的核酸序列，其編碼具有非-K12大腸桿菌植酸酶活性的多肽；或

(e)一個與(a)至(d)中任一個互補的核苷酸序列。

3.一個含有如權利要求1中所述分離的核酸分子的載體。

4.如權利要求3所述的載體，其是一個表達載體。

5.如權利要求4所述的載體，其可以從由pTrcHis2-PhE，pPIC9K-PhE，pMET-PhE和pKLAC-PhE所組成的組中選取。

6.一個含有如權利要求1所述的分離的核酸分子的細胞；

7.如權利要求6所述的細胞，其所述的分離的核酸分子包含在一個表達載體上。

8.如權利要求6所述的細胞，其是一個酵母細胞。

9.如權利要求6所述的細胞，其可以從由大腸桿菌(Escherichia?coli.)、巴斯德畢赤酵母(Pichia?pastoris)、甲醇酵母(Pichia?methanolica)和克魯維乳酸酵母(Kluyeromyces?lactis)所組成的組中選取。

10.如權利要求6所述的細胞，其可以選自以下組中：E.coli?MG1655，P.pastoris?GS115，P.methanolica?PMAD16和Kluyeromyces?lactis?GG799。

11.如權利要求6所述的細胞，其可以選自以下組中：轉化有pTrcHis2-PhE載體的E.coli?MG1655細胞，轉化有pPIC9K-PhE載體的P.pastoris?SMD1168細胞，轉化有pMET-PhE載體的P.methanolica?PMD16細胞和轉化有pKLAC-PhE載體的Kluyeromyces?lactis?GG799細胞。

12.一個多肽，其含有一個選自以下組中的氨基酸序列：

(a)一個如SEQ?ID?NO：3所示的氨基酸序列；或

(b)一個與SEQ?ID?NO：3所示的氨基酸序列的相似性99％以上的氨基酸序列，其所述的多肽具有非-K12大腸桿菌植酸酶活性。

13.一個通過發酵生產非K-12大腸桿菌植酸酶的工藝，其包括在一個有利于表達的條件下培養如權利要求6所述的細胞，以獲得具有非-K12大腸桿菌植酸酶活性的多肽。優選的，所選擇的細胞株為轉化有pTrcHis2-PhE載體的E.coli?MG1655細胞，轉化有pPIC9K-PhE載體的P.pastoris?SMD1168細胞，轉化有pMET-PhE載體的P.methanolicaPMD16細胞和轉化有pKLAC-PhE載體的Kluyeromyces?lactis?GG799細胞。