[發明專利]α-1-抗胰蛋白酶和載脂蛋白A-I的純化方法

有效

• 申請號: 200880025319.2
• 申請日: 2008-08-15
• 公開（公告）號: CN101778860A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發明（設計）人: N·布林克曼;D·比格萊爾;R·博利;V·弗奇
• 申請（專利權）人: CSL百靈有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/16;C07K1/30;C07K1/36;C07K14/775;C07K14/81
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

1.一種方法，該方法用于將載脂蛋白A-I(ApoA-I)以及α-1-抗胰蛋白酶(AAT) 從含有這兩種蛋白的單一的起始人血漿部分中純化，該方法包括：

a)對于被用作起始材料的起始人血漿部分進行處理，這樣使得ApoA-I以及 AAT二者均被溶解，其中起始人血漿部分選自：多個Cohn部分IV中的一種或多種、 來自Kistler-Nitschmann上清液A以及A+I的沉淀、或硫酸銨沉淀；

b)在等于或低于10℃的溫度，通過添加乙醇直至濃度為8-14％v/v并且該溶 液的pH調整到5至6來使ApoA-I從該溶液沉淀，這樣使得ApoA-I沉淀而AAT保持在 溶液中；

c)將沉淀的ApoA-I從該含有AAT的溶液中分離；并且

d)在一個或多個處理步驟中分別將ApoA-I以及AAT純化至藥物級純度。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述方法用于大規模純化。

3.如權利要求1所述的方法，其中該一種或多種Cohn部分IV是Cohn部分IV₁。

4.如權利要求1所述的方法，其中AAT和ApoA-I未暴露于13.69或以上的pH。

5.如權利要求1所述的方法，其中AAT和ApoA-I未暴露于13或以上的pH。

6.如權利要求1所述的方法，其中AAT和ApoA-I未暴露于12或以上的pH。

7.如權利要求1所述的方法，其中AAT和ApoA-I未暴露于11或以上的pH。

8.如權利要求1所述的方法，其中起始人血漿部分是在步驟a)中溶解在緩沖液 中，該緩沖液包括50mM-150mM?Tris以及0mM至20mM?NaCl而處于8.0至10.0的 pH。

9.如權利要求1所述的方法，進一步包括減少病毒的步驟。

10.如權利要求9所述的方法，其中減少病毒的步驟包括在大約60℃的巴斯德殺菌 處理。

11.如權利要求10所述的方法，其中巴斯德殺菌步驟是在包括至少40％w/w的蔗糖 以及至少4％w/w的乙酸鉀的溶液中進行的。

12.如權利要求9所述的方法，其中該減少病毒的步驟包括通過可以除去病毒顆粒 的過濾器的過濾處理。