[發(fā)明專利]卡介菌多糖核酸提取物在制備治療變態(tài)反應(yīng)性皮膚病的藥物中的應(yīng)用及其注射劑和制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200880023193.5
• 申請(qǐng)日: 2008-01-07
• 公開（公告）號(hào): CN101686992A
• 公開（公告）日: 2010-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 寧云山;關(guān)繼峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南九芝堂斯奇生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): A61K31/715
• 分類號(hào): A61K31/715;A61K9/08;A61K47/42;A61K35/74;A61P17/00
• 代理公司: 北京連和連知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 賀小明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域。具體說(shuō)，本發(fā)明涉及一種卡介菌多糖核酸 提取物在制備治療變態(tài)反應(yīng)性皮膚病的藥物中的應(yīng)用，以及由該卡介菌多 糖核酸提取物制備的卡介菌多糖核酸注射劑及其制備方法。

背景技術(shù)

卡介苗(Bacilli?Calmette?Guerin，BCG)是一種弱化的牛型分枝桿菌， 是目前預(yù)防結(jié)核病最有效的疫苗。自1948年以來(lái)，全球已有30億人接種， 其安全性已被證實(shí)。BCG除了用于預(yù)防結(jié)核病以外，還可以用于多種疾 病的治療，如變態(tài)反應(yīng)性疾病及腫瘤。但是由于其成分復(fù)雜，副作用如皮 疹、瘙癢等發(fā)生率較高。因此，對(duì)BCG進(jìn)行純化、提取其中的有效成分 有助于減少其副作用的發(fā)生率。卡介菌多糖核酸注射劑是卡介菌多糖核酸 提取物配以滅菌生理鹽水制成的免疫調(diào)節(jié)劑。臨床及實(shí)驗(yàn)資料均顯示，具 有廣泛的免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用，在改善免疫功能、抗過(guò)敏、抗感染方面具 有良好的療效，臨床用于多種免疫失調(diào)或免疫水平下降及過(guò)敏性疾病，如 難治性肺結(jié)核、支氣管哮喘、支氣管炎、病毒感染性疾病及皮膚變態(tài)反應(yīng) 疾病等。自從卡介菌多糖核酸注射劑上市后，其作用機(jī)制一直是醫(yī)學(xué)研究 的熱點(diǎn)，目前研究的成果表明：

卡介菌的主要成分包括脂類、多糖、蛋白和核酸，其中多糖(包括脂 類)和核酸組分發(fā)揮著重要的生理功能。在卡介菌中，多糖(主要包括肽 聚糖、阿拉伯半乳糖聚糖和分支菌酸)和脂類常結(jié)合在一起，構(gòu)成細(xì)胞壁 的主要成分。目前的研究還表明：BCG細(xì)胞壁和其他細(xì)胞器上存在可結(jié) 合人和動(dòng)物Toll受體(TLR)的配體，這些配體至少可結(jié)合5種Toll受體 (TLR1、TLR2、TLR4、TLR6、TLR9)，當(dāng)它們同TLR結(jié)合促進(jìn)樹突狀 細(xì)胞(DC)的成熟，并且誘導(dǎo)IL-12的分泌，IL-12對(duì)促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th1 細(xì)胞亞群轉(zhuǎn)化和IFN-γ分泌，從而產(chǎn)生Th1占優(yōu)勢(shì)的非特異性免疫反應(yīng)。

同樣，在卡介菌的核酸中含有豐富的CpG基序，CpG基列在體內(nèi)外 均能激活多種免疫活性細(xì)胞，包括樹突狀細(xì)胞(DC)、單核/巨噬細(xì)胞、自 然殺傷細(xì)胞(NK)、B細(xì)胞和T細(xì)胞，刺激免疫活性細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子 并能上調(diào)某些表面分子、趨化因子、粘附分子和共刺激分子等，誘導(dǎo)機(jī)體天 然免疫系統(tǒng)活化，并產(chǎn)生抗原特異性的獲得性免疫應(yīng)答。

綜上所述，BCG及卡介菌多糖核酸注射劑主要是其核酸和多糖通過(guò) 識(shí)別和結(jié)合人體的Toll受體(TLR1、TLR2、TLR4、TLR6、TLR9)，激 活DC、T細(xì)胞、B細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等多種免疫活性細(xì)胞，刺激多種免疫 活性細(xì)胞分泌免疫活性分子(細(xì)胞因子、趨化因子、粘附分子和共刺激分 子)而發(fā)揮抗微生物感染、抗腫瘤及調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡的作用。

近十年來(lái)的體內(nèi)、體外研究表明：卡介菌多糖核酸注射劑可以特異性 增強(qiáng)機(jī)體的Th1型細(xì)胞免疫反應(yīng)，抑制Th2細(xì)胞免疫反應(yīng)，進(jìn)而調(diào)節(jié) Th1/Th2平衡的作用。

研究表明，卡介菌多糖核酸注射劑可增加T細(xì)胞及脾細(xì)胞膜上IL-2 的表達(dá)，促進(jìn)T細(xì)胞克隆增殖及T細(xì)胞集落形成，此外卡介菌多糖核酸注 射劑還能增加活化T細(xì)胞IFN-γ的分泌，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞功能。卡介菌多糖 核酸注射劑還能抑制多種過(guò)敏反應(yīng)，穩(wěn)定嗜堿性和肥大性細(xì)胞的功能，減 少IgE的產(chǎn)生。因而，卡介菌多糖核酸注射劑在預(yù)防和治療微生物感染(細(xì) 菌、病毒等)、腫瘤的免疫治療或輔助治療及糾正Th1/Th2細(xì)胞失衡的變 態(tài)反應(yīng)疾病中將具有非常廣闊的應(yīng)用前景。

目前已上市的卡介菌多糖核酸注射液是通過(guò)從卡介菌培養(yǎng)經(jīng)熱酚法 提取的卡介菌多糖核酸提取物配制而成，現(xiàn)行的卡介菌多糖核酸提取物、 卡介菌多糖核酸注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和工藝按2000版《中國(guó)生物制品規(guī)程》 執(zhí)行。2000版《中國(guó)生物制品規(guī)程》規(guī)定的卡介菌多糖核酸提取物質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)為：該制劑為多糖、核酸及蛋白混合物，其中多糖為70％～80％左右， 核酸為10％～20％，卡介菌菌體蛋白含量小于1％，雜菌數(shù)不超過(guò)為100 個(gè)/克。2000版《中國(guó)生物制品規(guī)程》規(guī)定的卡介菌多糖核酸注射劑質(zhì)量 標(biāo)準(zhǔn)為：1ml/支，含卡介菌多糖0.28-0.42mg/ml，核酸不低于30μg。