[發明專利]在奶中產生外源蛋白的轉基因哺乳動物

無效

• 申請號: 200880022856.1
• 申請日: 2008-06-13
• 公開（公告）號: CN101755054A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: A·比爾卡維馳;A·普里恩科;C·梅洛;N·費爾南德茲;N·筑德維克茲;M·克瑞斯庫洛
• 申請（專利權）人: 斯特林貝爾德生物技術北美公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;B01D15/04
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李瑛

1.生產胰島素的方法，包括：

a)制備在其奶中產生修飾的胰島素前體的非人轉基因哺乳動物；

b)從非人轉基因哺乳動物獲得奶；

c)從奶中純化修飾的胰島素前體，得到純的修飾的胰島素前體；

d)將純的修飾的胰島素前體轉化成胰島素；和

e)純化胰島素。

2.權利要求1的方法，其中非人轉基因哺乳動物通過包括以下步驟的方法制得：

a)將編碼修飾的胰島素前體的核酸序列克隆至質粒中，由此將該序列可操作地連接到將指導該序列在乳房細胞中表達的啟動子上，得到表達質粒；

b)用表達質粒轉染體細胞，使得質粒摻入到體細胞的基因組中，得到轉基因體細胞；

c)將成熟的卵母細胞去核，得到去核的卵母細胞；

d)將一個轉基因體細胞與去核的卵母細胞融合，得到單細胞胚胎；

e)將胚胎植入受體哺乳動物的子宮中；和

f)監控懷孕直到轉基因哺乳動物的出生。

3.權利要求2的方法，其中啟動子是β酪蛋白啟動子，并且其中修飾的胰島素前體是修飾的哺乳動物胰島素前體。

4.權利要求3的方法，其中修飾的哺乳動物胰島素前體是修飾的人胰島素前體、修飾的牛胰島素前體、修飾的豬胰島素前體、修飾的綿羊胰島素前體、修飾的公山羊胰島素前體或修飾的嚙齒動物胰島素前體。

5.權利要求4的方法，其中修飾的哺乳動物胰島素前體是修飾的人胰島素前體。

6.權利要求5的方法，其中表達質粒進一步包含新霉素抗性基因。

7.權利要求6的方法，其中表達質粒是p?βmhuIP。

8.權利要求6的方法，其中表達質粒是pNJK?IP。

9.權利要求6的方法，其中表達質粒是pβKLE?IP。

10.權利要求2的方法，其中哺乳動物是在其奶中產生修飾的人胰島素前體的牛，其基因組包含整合的質粒，其中該質粒包含編碼修飾的人胰島素前體的序列和指導該序列在哺乳動物的乳房細胞中表達的β酪蛋白啟動子。

11.權利要求10的方法，其中質粒進一步包含新霉素抗性基因。

12.權利要求11的方法，其中質粒是pβmhu?IP。

13.權利要求11的方法，其中質粒是pNJK?IP。

14.權利要求2的方法，其中哺乳動物是在其奶中產生融合蛋白的牛，該融合蛋白包含α乳清蛋白的片段、腸激酶切割位點和修飾的人胰島素前體，該牛的基因組包含整合的質粒，其中該質粒包含編碼融合蛋白的序列和指導該序列在哺乳動物的乳房細胞中表達的β酪蛋白啟動子。

15.權利要求14的方法，其中質粒進一步包含新霉素抗性基因。

16.權利要求15的方法，其中質粒是pβKLE?IP。

17.權利要求2的方法，其中體細胞是成纖維細胞。

18.權利要求2的方法，其中通過從用于在其奶中生產修飾的胰島素前體的雌性轉基因動物分離來獲得轉基因體細胞。

19.權利要求18的方法，其中轉基因體細胞是成纖維細胞。

20.權利要求1、2或18的方法，其中哺乳動物屬于牛物種、豬物種、綿羊物種、公山羊物種或嚙齒動物物種。

21.權利要求20的方法，其中哺乳動物屬于牛物種。

22.權利要求1、2或18的方法，其中胰島素和修飾的胰島素前體分別為哺乳動物胰島素和修飾的哺乳動物胰島素前體。

23.權利要求22的方法，其中哺乳動物胰島素和修飾的哺乳動物胰島素前體各自為人胰島素和修飾的人胰島素前體、牛胰島素和修飾的牛胰島素前體、豬胰島素和修飾的豬胰島素前體、綿羊胰島素和修飾的綿羊胰島素前體、公山羊胰島素和修飾的公山羊胰島素前體、或嚙齒動物胰島素和修飾的嚙齒動物胰島素前體。

24.權利要求23的方法，其中哺乳動物胰島素和修飾的哺乳動物胰島素前體各自為人胰島素和修飾的人胰島素前體。