[發明專利]測量凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的方法

無效

• 申請號: 200880014577.0
• 申請日: 2008-05-02
• 公開（公告）號: CN101675342A
• 公開（公告）日: 2010-03-17
• 發明（設計）人: 丹尼斯·德賓
• 申請（專利權）人: 阿庫米特里克斯股份有限公司
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 封新琴

相關申請的交叉參考

本申請要求在2007年5月3日提交的美國序列號第60/915,820號的權益，其在此全部引入作為參考。

技術領域

本發明涉及診斷測定法(diagnostic?assay)領域，具體而言涉及測定血液樣品中血小板功能活性以研究抗血小板組合物的效果，以及更具體而言涉及血小板激活劑(例如凝血酶受體激活肽(TRAP))用于測量靈敏度提高的凝血酶受體抑制劑(包括E5555(Eisai)和SCH?530348(Schering-Plough))的血小板功能的用途。

背景技術

血小板在哺乳動物生理學中起的作用非常多樣化，但是其主要作用是促進止血。在許多情況下，希望評價血液凝固的能力，其是常常由血小板粘附和/或聚集的能力控制的參數。因此，令人感興趣的是對血小板粘附功能的評估。例如，令人感興趣的問題包括施用藥物是否能阻斷或促進血塊形成，或者是否在手術操作前檢測血小板功能的不足。令人感興趣的還有評估作為正在測試的新藥或者被批準正在患者中用于臨床治療的血小板抑制劑的功效。

已知血小板在多種條件下和多種不同的反應物存在下聚集。血小板聚集是用來描述血小板彼此結合的術語。體外的血小板凝集依賴于血小板在受到聚集誘導劑(如凝血酶、二磷酸腺苷(ADP)或膠原)激活后將纖維蛋白原結合到血小板表面的能力。

血小板在維持正常止血中起著關鍵的作用。當暴露于損傷的血管時，血小板將粘附在暴露的內皮下基質上。最初的粘附之后，在損傷的部位釋放或產生的各種因子(如凝血酶、ADP或膠原)激活血小板。一旦血小板被激活，血小板糖蛋白GPIIb/IIIa受體發生構象改變，使得其結合纖維蛋白原和/或馮維勒布蘭德因子(von?Willebrand?factor)。正是這種在鄰近的血小板上通過GPIIb/IIIa受體結合多價纖維蛋白原和/或馮維勒布蘭德因子分子導致額外的血小板補充到損傷部位并聚集形成止血栓子或血栓。

體外的血小板聚集儀法(platelet?aggregometry)是用來評估體內血小板形成導致初級止血栓子的聚集的能力的方法。在這種技術中，將聚集劑(例如ADP或膠原)加入到全血或富含血小板的血漿中，并監測血小板的聚集。血小板聚集儀法是可以幫助患者診斷和選擇療法的診斷手段。目前測量血小板聚集的測定法昂貴、耗時、繁瑣，并且一般不適合臨床環境。

已經開發出快速的測定血小板功能測定法并在美國專利第5,763,199號(Coller)中進行了描述，其在此全部引入作為參考。該測定法測定全血中的糖蛋白GPIIb/IIIa受體阻滯(receptor?blockade)。當用GPIIb/IIIa配體例如纖維蛋白原包覆的小聚合物珠(small?polymeric?beads)與含有具有未被阻滯的、激活的GPIIb/IIIa受體的血小板接觸時導致所述小聚合物珠的凝集。沒有凝集說明GPIIb/IIIa受體沒有激活和/或者GPIIb/IIIa受體被阻滯。在優選的實施方式中，凝血酶受體激活劑的加入導致產生足以在床邊進行的快速和方便的測定法，并且如果所述GPIIb/IIIa受體未受阻滯，那么所述測定法致使小聚合物珠在方便的、已知的時間段內凝集。所述測定法包括將要測試的血液在不打開收集容器的情況下從收集容器轉移至測定裝置(assay?device)的能力。這種血小板聚集測定法可以與激活凝血時間(ACT)同時進行，測量ACT是用來評估肝素化的充分程度。

血小板聚集在血栓形成和急性冠狀動脈疾病中起關鍵作用。一種用于治療血栓形成的方法涉及抑制凝血酶的酶活性，且用于這種目的的化合物包括了肝素、低分子量肝素、水蛭素、阿加曲班、水蛭肽等。所有的這些化合物抑制凝血酶的酶活性，并且通過在不特異性抑制凝血酶對細胞作用的情況下抑制纖維蛋白血塊的形成而發揮作用。因而，流血傾向是臨床上遇到的常見的副作用。