[發(fā)明專利]抗體多肽在C-末端的偶聯(lián)

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200880014111.0
• 申請(qǐng)日: 2008-02-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101687917A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: K·克加德;B·佩施克
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 諾沃-諾迪斯克有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/00
• 分類號(hào): C07K16/00;A61K47/48;C07K16/24
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 李 進(jìn);付 磊

1.一種為兩個(gè)抗體片段的二聚體的化合物，其中所述抗體片段 在它們的重鏈(HC)多肽的C-末端偶聯(lián)。

2.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中第一個(gè)HC多肽的C-末端具 有以下結(jié)構(gòu)

其中第一個(gè)多肽用″*″標(biāo)記，而第二個(gè)HC-多肽連接至基團(tuán)R^連接基。

3.依據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中第一個(gè)HC-多肽的C-末端具 有以下結(jié)構(gòu)

4.一種抗體片段，其中所述HC-多肽的C-末端具有以下結(jié)構(gòu)

其中的HC多肽用″*″標(biāo)記，而R^rg是帶有選自疊氮化物、炔烴、O-烷 化的羥胺、酮、醛、1，2-二醇或1，2-氨基醇的基團(tuán)的基團(tuán)。

5.權(quán)利要求4的抗體片段，其中所述HC-多肽的C-末端具有以 下結(jié)構(gòu)

6.權(quán)利要求4-5中任一項(xiàng)的抗體片段，其中-R^rg選自

7.一種用于使兩個(gè)抗體片段二聚化的方法，該方法包括以下步 驟

(a)將第一個(gè)化學(xué)基團(tuán)引入到第一個(gè)抗體片段的HC多肽的C-末 端，

(b)將第二個(gè)化學(xué)基團(tuán)引入到第二個(gè)抗體片段的HC多肽的C-末 端，和

(c)使第一個(gè)化學(xué)基團(tuán)與第二個(gè)化學(xué)基團(tuán)反應(yīng)，形成兩個(gè)抗體片 段的共價(jià)鍵。

8.依據(jù)權(quán)利要求7的方法，該方法包括以下步驟

(a′)通過(guò)在親核試劑的存在下與酶反應(yīng)，將第一個(gè)化學(xué)基團(tuán)引入 到第一個(gè)抗體片段的HC多肽的C-末端，

(b′)通過(guò)在親核試劑的存在下與酶反應(yīng)，將第二個(gè)化學(xué)基團(tuán)引入 到第二個(gè)抗體片段的HC多肽的C-末端，和

(c′)使第一個(gè)化學(xué)基團(tuán)與第二個(gè)化學(xué)基團(tuán)反應(yīng)，形成兩個(gè)抗體片 段的共價(jià)鍵。

9.依據(jù)權(quán)利要求7的方法，該方法包括以下步驟

(a″)通過(guò)在親核試劑的存在下與酶反應(yīng)，將第一個(gè)化學(xué)基團(tuán)引入 到第一個(gè)抗體片段的HC多肽的C-末端，

(b″)通過(guò)在親核試劑的存在下與酶反應(yīng)，將第三個(gè)化學(xué)基團(tuán)引入 到第二個(gè)抗體片段的HC多肽的C-末端，

(b′″)使第三個(gè)化學(xué)基團(tuán)與帶有第四個(gè)和第二個(gè)化學(xué)基團(tuán)的分子 反應(yīng)，通過(guò)第三個(gè)化學(xué)基團(tuán)和第四個(gè)化學(xué)基團(tuán)的反應(yīng)，使所述分子共 價(jià)連接至第二個(gè)抗體片段的HC多肽的C-末端，和

(c)使第一個(gè)化學(xué)基團(tuán)與第二個(gè)化學(xué)基團(tuán)反應(yīng)，形成兩個(gè)抗體片 段的共價(jià)鍵。

10.依據(jù)權(quán)利要求7-9中任一項(xiàng)的方法，其中所述第一個(gè)化學(xué)基 團(tuán)和所述第二個(gè)化學(xué)基團(tuán)互不相同。

11.依據(jù)權(quán)利要求7-10中任一項(xiàng)的方法，其中疊氮化物和炔烴之 間的反應(yīng)被用于形成兩個(gè)抗體片段之間的連鍵，和所述疊氮化物和炔 烴之間的反應(yīng)是由銅(I)離子催化的。

12.依據(jù)權(quán)利要求7-10中任一項(xiàng)的方法，其中O-烷化的羥胺和 酮或醛之間的反應(yīng)被用于形成兩個(gè)抗體片段之間的連鍵。

13.依據(jù)權(quán)利要求7-12中任一項(xiàng)的方法，其中所述酶是羧肽酶Y。

14.依據(jù)權(quán)利要求7-13中任一項(xiàng)的方法，其中兩個(gè)HC多肽中的 至少一個(gè)的C-末端氨基酸序列是-Leu-Leu-Ala。

15.依據(jù)權(quán)利要求8-14中任一項(xiàng)的方法，其中所述親核試劑選自