[發明專利]用于制備甲基丙二酰輔酶A或乙基丙二酰輔酶A的酶及其用途

無效

• 申請號: 200880010552.3
• 申請日: 2008-03-27
• 公開（公告）號: CN101720356A
• 公開（公告）日: 2010-06-02
• 發明（設計）人: M·波特;A·馬克斯;G·福克斯;B·艾爾伯;T·J·厄布
• 申請（專利權）人: 贏創德固賽有限責任公司;阿爾貝特-路德維希斯弗賴堡大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12P7/42
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 羅菊華

1.分離的DNA，其選自下列序列：

a)根據SEQ?ID?NO：01的序列，

b)無內含子的序列，其衍生自根據a)的序列并且與根據SEQ?ID?NO：01的序列編碼相同的蛋白質或肽，

c)編碼包含根據SEQ?ID?NO：02的氨基酸序列的蛋白質或肽的序列，

d)與根據a)至c)的序列至少80％同一的序列，

e)與根據組a)至d)之一的序列的反義鏈雜交或者在考慮遺傳密碼簡并性的情況下將能夠與之雜交的序列，

f)根據組a)至e)之一的序列的衍生物，其通過一個或多個堿基的置換、添加、倒位和/或刪除而獲得，

g)在遺傳密碼簡并性范圍之內相應于SEQ?ID?NO：01的序列，

h)具有SEQ?ID?NO：01的中性有義突變的序列，以及

i)與根據組a)至h)之一的序列互補的序列。

2.載體，其包含權利要求1中所定義的根據組a)至h)之一的DNA序列。

3.根據權利要求2的載體用于轉化細胞的用途。

4.經轉化的細胞，其通過用根據權利要求2的載體進行轉化而獲得。

5.分離的多肽，其具有帶有SEQ?ID?NO：02的氨基酸序列，或者當在SEQ?ID?NO：02中刪除、插入、置換至多10個氨基酸或將至多10個氨基酸附加至帶有SEQ?ID?NO：02的氨基酸序列的C-或N-末端時而獲得的氨基酸序列。

6.細胞，所述細胞相對于其野生型而言如此地經基因工程改造，從而與其野生型相比較，它能夠形成更多的3-羥基異丁酸或其衍生物。

7.根據權利要求6的細胞，其中所述細胞具有相比于其野生型而言增加的酶E₁的活性，所述酶E₁由權利要求1中所定義的根據組a)至h)之一的DNA序列編碼。

8.根據權利要求6或7的細胞，其中所述細胞包含具有權利要求1中所定義的根據組a)至h)之一的DNA序列的外源DNA。

9.根據權利要求7或8的細胞，其中所述細胞具有相比于其野生型而言增加的酶E₁₁的活性，所述酶E₁₁由根據組A)至H)之一的DNA序列編碼：

A)根據SEQ?ID?NO：03的序列，

B)無內含子的序列，其衍生自根據A)的序列并且與根據SEQ?ID?NO：03的序列編碼相同的蛋白質或肽，

C)編碼包含根據SEQ?ID?NO：04的氨基酸序列的蛋白質或肽的序列，

D)與根據組A)至C)之一，特別優選地根據組A)的序列至少80％同一的序列，

E)與根據組A)至D)之一，特別優選地根據組A)的序列的反義鏈雜交或者在考慮遺傳密碼簡并性的情況下將能夠與之雜交的序列，

F)根據組A)至D)之一，特別優選地根據組A)的序列的衍生物，其通過至少一個堿基的置換、添加、倒位和/或刪除而獲得，

G)在遺傳密碼簡并性范圍之內相應于SEQ?ID?NO：03的序列，或者

H)具有SEQ?ID?NO：03的中性有義突變的序列。

10.根據權利要求4和6-9中之一的細胞，其中所述細胞屬于類球紅細菌這一種類。

11.用于制備經基因工程改造的細胞的方法，其包括提高細胞中酶E₁的活性的步驟，所述酶E₁由權利要求1中所定義的根據組a)至h)之一的DNA序列編碼，或者所述酶E₁具有帶有SEQ?ID?NO：02的氨基酸序列，或與根據SEQ?ID?NO：02的氨基酸序列享有至少50％同一性的氨基酸序列。

12.根據權利要求11的方法，其中所述方法另外還包括提高細胞中酶E₁₁的活性的步驟，所述酶E₁₁由權利要求9中所定義的根據組A)至H)之一的DNA序列編碼，或者所述酶E₁₁具有帶有SEQ?ID?NO：04的氨基酸序列，或與根據SEQ?ID?NO：04的氨基酸序列具有至少50％同一性的氨基酸序列。

13.根據權利要求11或12的方法，其中所述細胞屬于類球紅細菌這一種類。