[發明專利]包括用含3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸的共存培養基培養植物組織的共存步驟的提高植物轉化效率的方法

有效

• 申請號: 200880006564.9
• 申請日: 2008-02-28
• 公開（公告）號: CN101668418A
• 公開（公告）日: 2010-03-10
• 發明（設計）人: 石田佑二;樋江井佑弘
• 申請（專利權）人: 日本煙草產業株式會社
• 主分類號: A01H1/00
• 分類號: A01H1/00;C12N15/09
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 封新琴

1.一種提高玉米未成熟胚轉化效率的方法，該方法包括：

(i)共存步驟：用含3，6-二氯-2-甲氧基苯甲酸的共存培養基培養接種了土 壤桿菌的玉米未成熟胚，所述共存培養基中不含3，6-二氯-2-甲氧基苯甲酸 以外的生長素類，且所述共存培養基為以LS無機鹽類為基本成分的培養基， 所述共存培養基還含有硝酸銀和/或硫酸銅；和

(ii)選擇步驟：用含有2，4-二氯苯氧基乙酸的選擇培養基培養(i)中所得 的組織，所述選擇培養基中不含2，4-二氯苯氧基乙酸以外的生長素類，且所 述選擇培養基為以LS無機鹽類為基本成分的培養基，所述選擇培養基中含 有抗生素和/或除草劑，所述抗生素選自潮霉素、卡那霉素、滅瘟素S、羧 芐西林、頭孢噻肟，所述除草劑選自草胺膦、雙丙胺膦、草甘膦。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述共存培養基中的3，6-二氯-2- 甲氧基苯甲酸的濃度為0.5-3.0mg/l。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，與僅使用2，4-二氯苯氧基乙 酸作為共存培養基中的生長素類的情況相比，玉米的轉化效率提高至少1.3 倍。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其中，所述玉米未成熟胚經過了 熱處理和/或離心處理。

5.根據權利要求3所述的方法，其中，所述玉米未成熟胚經過了熱處理 和/或離心處理。

6.一種轉化玉米的制備方法，該方法包括以下步驟：

(i)共存步驟，用含3，6-二氯-2-甲氧基苯甲酸的共存培養基培養接種了 土壤桿菌的玉米未成熟胚，所述共存培養基中不含3，6-二氯-2-甲氧基苯甲 酸以外的生長素類，且所述共存培養基為以LS無機鹽類為基本成分的培養 基，所述共存培養基還含有硝酸銀和/或硫酸銅；

(ii)選擇步驟：用含2，4-二氯苯氧基乙酸的培養基培養(i)中所得的組織， 所述選擇培養基中不含2，4-二氯苯氧基乙酸以外的生長素類，且所述選擇培 養基為以LS無機鹽類為基本成分的培養基，所述選擇培養基中含有抗生素 和/或除草劑，所述抗生素選自潮霉素、卡那霉素、滅瘟素S、羧芐西林、 頭孢噻肟，所述除草劑選自草胺膦、雙丙胺膦、草甘膦；和

(iii)再分化步驟：用含選擇藥物的再分化培養基培養(ii)中選擇出的組 織，使其再分化。