[發(fā)明專利]一種川附子組織培養(yǎng)及快速繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810306725.8
• 申請日: 2008-12-31
• 公開（公告）號: CN101926284A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發(fā)明（設計）人: 唐莉;田孟良;楊華;吳錫明;張小琴;劉天成;官華;王巧;胡丹;胡瑩瑩
• 申請（專利權）人: 雅安三九中藥材科技產(chǎn)業(yè)化有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00;C12N5/04
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產(chǎn)權代理有限公司 51214
• 代理人: 劉明芳;劉雪蓮

技術領域

本發(fā)明屬于藥材栽培技術領域，特別涉及一種川附子組織培養(yǎng)及快速繁殖的方法。

背景技術

附子(Radix?Aconiti?Lateralis?Preparata)是毛茛科植物烏頭Aconitum?carmichaeli?Debx.的子根的加工品，具有回陽救逆、補火助陽、散寒止痛等功效；用于亡陽虛脫、肢冷脈微、陽痿、宮冷、心腹冷痛、虛寒吐瀉、陰寒水腫、陽虛外感、寒濕痹痛、陰疽瘡瘍等。

附子是四川傳統(tǒng)道地中藥材之一，具有重要的藥用和經(jīng)濟價值。四川省江油市作為附子的道地產(chǎn)區(qū)，有1400多年的種植歷史，2006年江油附子取得地理標志產(chǎn)品保護(2006年第41號公告)，是國家附子生產(chǎn)商品基地，產(chǎn)品行銷全國和出口。但近年來在江油附子生產(chǎn)中出現(xiàn)了一些問題，附子種植面積日益萎縮，藥農(nóng)經(jīng)濟效益逐年下降，附子產(chǎn)業(yè)前景堪憂。主要原因有以下兩點：其一，附子的頻繁換種并缺乏統(tǒng)一管理，栽培品種存在不同程度的混亂和混雜現(xiàn)象，嚴重影響了附子的產(chǎn)品質(zhì)量及其藥用價值。其二，附子生產(chǎn)長期采用無性繁殖，病害累積，其中霜霉病、白絹病、根腐病等病害頻繁發(fā)生，導致附子產(chǎn)量降低，生產(chǎn)成本增加，嚴重影響和制約著附子生產(chǎn)的發(fā)展。

目前烏頭的人工栽培主要靠子根繁殖，耗種量大，而且由于病毒感染等原因造成種性退化，產(chǎn)量和品質(zhì)降低，每年需在高山留種換種，難以適應規(guī)模化和標準化生產(chǎn)的需要，通過組織培養(yǎng)實現(xiàn)種苗脫毒生產(chǎn)是解決上述問題的主要途徑之一。

組織培養(yǎng)特別是藥用植物的組織培養(yǎng)存在種群差異，甚至同一植株的不同組織、不同器官在組織培養(yǎng)時都可能存在較大差異。胡延玉(植物生理學通訊，1985，16(2)：37-40)利用莖尖和帶腋芽莖段培養(yǎng)獲得再生植株，但所用培養(yǎng)基成分復雜，生長周期長。林靜等(貴州科學，1998，16(2)：120)利用貴州烏頭葉片和幼莖進行培養(yǎng)，葉片只誘導出愈傷組織階段而未分化出芽。關文靈等(中草藥，2003，34(6)：561-563)以云南烏頭試管苗的葉片為外植體，通過直接誘導不定芽的途徑得到再生苗。王躍華等(中國中藥雜志，2005，30(15)：1197-1199)以葉柄為外植體得到再生苗。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的是針對上述附子生產(chǎn)中存在的問題，提供一種川附子組織培養(yǎng)及快速繁殖方法，主要解決川附子生產(chǎn)中現(xiàn)行品種的抗病性差、產(chǎn)量低而不穩(wěn)、品種混雜等問題，為川附子GAP生產(chǎn)奠定基礎。

本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種川附子組織培養(yǎng)及快速繁殖方法，包括下述主要步驟：

第一步：外植體的選擇與消毒

三月份選取一年生健壯川附子(烏頭)植株的莖尖、葉片、根、莖段、帶腋芽的莖段、葉柄、或者上一年收取的種子等(以莖尖、葉片、莖段、帶腋芽的莖段為佳)為外植體(作為接種材料)，低溫4℃處理3天；用自來水沖洗干凈，用70～75％酒精處理15～20s，0.1％升汞液浸泡10～12min，倒去升汞液，用無菌水換洗4～5次；將莖尖剝離后切成0.2mm長，根、莖段、帶腋芽的莖段及葉柄切成1.5cm左右(可為1.3～1.7cm)，葉片切成1cm×1cm方塊(種子不需切)，待用；

第二步：接種、誘導愈傷組織

以MS為基本培養(yǎng)基，在基本培養(yǎng)基中附加NAA(α-萘乙酸)0.1～0.2?mg/L+6-BA(6-芐基腺嘌呤)1.0～4.0mg/L作為誘導愈傷組織的培養(yǎng)基，將上述第一步處理好的外植體按常規(guī)方法接種進行愈傷組織誘導，黑暗培養(yǎng)28～32天左右，得到愈傷組織；

第三步：誘導叢生芽

在MS基本培養(yǎng)基中附加NAA?0.1～0.2mg/L+6-BA?2.0～2.5mg/L作為分化培養(yǎng)基誘導叢生芽，將上述第二步獲得的愈傷組織轉(zhuǎn)接到該分化培養(yǎng)基上，進行叢生芽誘導，光照培養(yǎng)28～32天左右，誘導出叢生芽；

第四步：誘導生根

在MS基本培養(yǎng)基中附加IBA(吲哚丁酸)1.0mg/L+AC(活性碳)3.0g/L⁺PVP(聚乙烯吡咯烷酮)3.0g/L作為生根培養(yǎng)基，將上述第三步長至3～5cm的叢生芽轉(zhuǎn)接到該生根培養(yǎng)基上誘導根的形成，培養(yǎng)時間為20～25天左右，得到生根的試管苗；

第五步：煉苗移栽