[發(fā)明專利]一種川附子組織培養(yǎng)及快速繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810306725.8
• 申請日: 2008-12-31
• 公開（公告）號: CN101926284A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐莉;田孟良;楊華;吳錫明;張小琴;劉天成;官華;王巧;胡丹;胡瑩瑩
• 申請（專利權(quán)）人: 雅安三九中藥材科技產(chǎn)業(yè)化有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00;C12N5/04
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51214
• 代理人: 劉明芳;劉雪蓮

1.一種川附子組織培養(yǎng)及快速繁殖方法，其特征在于：

第一步：外植體的選擇與消毒

三月份選取一年生健壯川附子植株的莖尖、葉片、根、莖段、帶腋芽的莖段、葉柄、或者上一年收取的種子為外植體，低溫4℃處理3天；用自來水沖洗干凈，用70～75％酒精處理15～20s，0.1％升汞液浸泡10～12min，倒去升汞液，用無菌水換洗4～5次；將莖尖剝離后切成0.2mm長，根、莖段、帶腋芽的莖段及葉柄切成1.3～1.7cm，葉片切成1cm×1cm大小，待用；

第二步：接種、誘導(dǎo)愈傷組織

以MS為基本培養(yǎng)基，在基本培養(yǎng)基中附加NAA?0.1～0.2mg/L+6-BA?1.0～4.0mg/L作為誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基，將上述第一步處理好的外植體按常規(guī)方法接種進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，黑暗培養(yǎng)28～32天，得到愈傷組織；

第三步：誘導(dǎo)叢生芽

在MS基本培養(yǎng)基中附加NAA?0.1～0.2mg/L+6-BA?2.0～2.5mg/L作為分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)叢生芽，將上述第二步獲得的愈傷組織轉(zhuǎn)接到該分化培養(yǎng)基上，進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)，光照培養(yǎng)28～32天，誘導(dǎo)出叢生芽；

第四步：誘導(dǎo)生根

在MS基本培養(yǎng)基中附加IBA?1.0mg/L+AC?3.0g/L-1；適合愈傷組織增殖與叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為：MS+NAA?0.2mgL+-1PVP?3.0g/L作為生根培養(yǎng)基，將上述第三步長至3～5cm左右的叢生芽轉(zhuǎn)接到該生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)根的形成，培養(yǎng)時間為20～25天，得到生根的試管苗；

第五步：煉苗移栽

待上述第四步的試管苗在生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)至根長4～5cm、植株6～7cm，選擇健壯幼苗打開瓶蓋進(jìn)行煉苗，室溫?zé)捗?～3天后，用自來水洗凈苗上的培養(yǎng)基，移栽至用0.1％多菌靈處理過的腐質(zhì)土和珍珠巖混合基質(zhì)中，置于溫度22±1℃，光照周期12h/d，光照強(qiáng)度1500～2000lx的生長室內(nèi)，薄膜覆蓋，保持環(huán)境濕潤，一周后去掉薄膜轉(zhuǎn)入大田栽培。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的川附子組織培養(yǎng)及快速繁殖方法，其特征在于：

所述的第一步中的外植體選自一年生健壯無病害的川附子植株的莖尖、葉片、莖段、帶腋芽的莖段，經(jīng)低溫4℃處理3天后用于消毒、接種、誘導(dǎo)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的川附子組織培養(yǎng)及快速繁殖方法，其特征在于：

所述的MS基本培養(yǎng)基是指經(jīng)過改良的MS培養(yǎng)基，其中KH2PO4的用量為：200mg/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的川附子組織培養(yǎng)及快速繁殖方法，其特征在于：

所述的第五步中的腐質(zhì)土和珍珠巖混合基質(zhì)，為腐質(zhì)土與珍珠巖以體積比為2∶1的混合基質(zhì)。