[發(fā)明專利]靜脈注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200810302536.3 | 申請日： | 2008-07-04 |
| 公開（公告）號： | CN101306200A | 公開（公告）日： | 2008-11-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 蔣德席;沈中陽;魏憲義;蹇遠(yuǎn)勇;肖黃根;劉文芳 | 申請（專利權(quán)）人： | 四川遠(yuǎn)大蜀陽藥業(yè)股份有限公司;蔣德席;沈中陽 |
| 主分類號： | A61K39/395 | 分類號： | A61K39/395;C07K16/06;C07K1/14;A61P1/16;A61P31/20 |
| 代理公司： | 成都虹橋?qū)＠聞?wù)所 | 代理人： | 武森濤 |
| 地址： | 610214四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 靜脈注射 乙型肝炎 免疫球蛋白 制備 方法 | ||
1.靜脈注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制備方法，包括如下步驟：
a、融化血漿：將乙型肝炎表面抗體效價≥8IU/ml的原料血漿于0～4℃融化；
b、組分分離：用質(zhì)量百分含量為0.9％的氯化鈉溶液稀釋血漿至蛋白質(zhì)含量為45～55g/L，調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.4，加入95％乙醇至反應(yīng)液乙醇濃度為8％，反應(yīng)過程溫度控制在-2.5±0.5℃，離心分離上清液，即得FI反應(yīng)液；
c、過濾：將FI反應(yīng)液調(diào)節(jié)pH值至6.80±0.10，加入95％乙醇至乙醇終濃度為20％，將反應(yīng)液溫度控制在5.0±0.5℃，加入硅藻土吸附雜質(zhì)，攪拌、靜置、過濾，所得沉淀即為FII+III沉淀；
d、沉淀溶解：將FII+III沉淀用0.01mol/L的氯化鈉溶液溶解，調(diào)節(jié)溶液pH值至5.10±0.05，調(diào)節(jié)溶液離子強(qiáng)度為0.01，加入95％乙醇至溶液中乙醇濃度為17％，控制溶液溫度為-4.5±0.5℃，攪拌、靜置、過濾，所得濾液即為FII濾液；
e、濾液沉淀：FII濾液中加入氯化鈉溶液，調(diào)節(jié)溶液離子強(qiáng)度為0.05，調(diào)節(jié)溶液pH值至6.90±0.05，加入95％乙醇至溶液中乙醇濃度為25％，每升乙醇補(bǔ)加1mol/L氯化鈉溶液0.05L，控制最終反應(yīng)液溫度為-7.5±0.5℃，攪拌、靜置、過濾，即得FII沉淀；
f、層析：FII沉淀用注射用水溶解后過濾，濾液用注射用水透析脫醇，然后用陰離子交換凝膠層析純化，得到IgG溶液；
g、超濾：將IgG溶液超濾，所得超濾液4倍濃縮，然后用注射用水調(diào)節(jié)超濾液中蛋白濃度為15±5g/L，用0.5mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)超濾液pH值至4.8±0.1、電導(dǎo)率不超過350?uS/cm；
h、巴氏滅活病毒：將g步驟所得溶液于60±0.5℃水浴中連續(xù)加溫10小時；
i：低pH孵放滅活病毒：將h步驟滅活病毒后的蛋白溶液過濾、澄清、再次超濾，然后用0.5mol/L的鹽酸調(diào)整蛋白溶液pH值為3.8～4.4、乙型肝炎表面抗體效價≥50IU/ml，補(bǔ)加麥芽糖至麥芽糖質(zhì)量濃度為10％，過濾除菌，然后于23～25℃放置21天；
j：成品分裝：按所需規(guī)格分裝、即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靜脈注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制備方?法，其特征在于：b、c、d步驟中調(diào)節(jié)pH值所用的pH值調(diào)節(jié)劑為pH4.0的乙酸-乙酸鈉緩沖液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靜脈注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制備方法，其特征在于：c步驟中硅藻土的加入量為每升溶液18g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靜脈注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制備方法，其特征在于：d步驟沉淀溶解是用6-12倍W/V的0.01mol/L氯化鈉溶液溶解。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靜脈注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制備方法，其特征在于：e步驟中調(diào)節(jié)pH值所用的pH值調(diào)節(jié)劑為1mol/L的NaHCO3溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靜脈注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制備方法，其特征在于：f步驟透析脫醇所用透析袋的截留分子量為30KD。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的靜脈注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制備方法，其特征在于：f步驟陰離子交換凝膠層析所用凝膠柱為PS370型。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靜脈注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制備方法，其特征在于：i步驟中所述的再次超濾所用的超濾膜截留分子量為10KD。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靜脈注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制備方法，其特征在于：j步驟所述的規(guī)格為50IU/ml，40ml。?
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