[發明專利]日本血吸蟲 TSP蛋白胞外環2編碼基因、多肽、融合蛋白及在疫苗制備中的用途

有效

• 申請號: 200810301535.7
• 申請日: 2008-05-09
• 公開（公告）號: CN101270361A
• 公開（公告）日: 2008-09-24
• 發明（設計）人: 魏于全;楊莉;陳俐娟
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12N15/30
• 分類號: C12N15/30;C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12Q1/04;C12Q1/68;C07K14/44;C07K19/00;A61K48/00;A61K39/002;A61K47/36
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所
• 代理人: 武森濤

技術領域：

本發明屬于生物技術領域，具體涉及日本血吸蟲的tetraspanins蛋白(TSPs，四次跨膜蛋白)胞外環2(EC-2)的編碼基因Sj-TSP-2，以及以其為基礎構建的融合蛋白和在制備日本血吸蟲疫苗中的用途。

背景技術：

血吸蟲病是由于人或哺乳動物感染了血吸蟲引起的一種人畜共患寄生蟲病，在世界范圍內其患病人數僅次于瘧疾，是第二大熱帶寄生蟲病。該病呈全球性分布，主要發生在發展中國家的城鎮周邊地區和偏遠農村。在76個國家大約6.52億人受到威脅，超過2億人受到不同程度的感染，其中1.2億屬現癥患者，0.2億出現嚴重并發癥，嚴重影響著人類的健康和經濟的發展。

在我國流行在我國流行的是日本血吸蟲病，該病傳播環節多、流行因素復雜，是對健康危害最為嚴重、防治難度最大的血吸蟲病。近年我國血吸蟲病的流行范圍有所擴大，部分地區疫情死灰復燃，血防工作形勢嚴峻。目前現有患者84.25萬，釘螺面積38.46億平方米，受感染者不計其數。

目前血吸蟲的控制主要依賴于診斷和唯一有效的化療藥物——吡喹酮的使用，但吡喹酮雖能降低感染率和發病率，卻不能阻斷傳播，對已經發生的肝脾損害沒有作用，接觸疫水后仍會發生再次感染。另有證據顯示，藥物的長期使用尚不能排除血吸蟲有潛在抗藥性的危險。滅螺和吡喹酮大規模化療，不能從根本上解決血吸蟲病防治問題。面對這樣巨大的挑戰，尋找長效防治措施成為主要目標，疫苗預防作用被作為血吸蟲病防治的重要措施而倍受關注。近年來，世界衛生組織專家Bergquist及其同事在報道中指出，預防性疫苗的單獨使用或與化療藥物聯合，均為血吸蟲病的可持續控制提供了一條理想途徑。

為了推動血吸蟲疫苗的研制，世界衛生組織——熱帶病研究培訓特別規劃(TDR)將血吸蟲疫苗研制置于血吸蟲病防治研究的重要地位。包括中國、美國、法國、英國和巴西等國家在內的各政府和研究機構都在積極地開展血吸蟲疫苗的研究。幾十年來，血吸蟲疫苗研究逐步從死疫苗、減毒尾蚴疫苗，發展到明確亞單位的基因工程疫苗。隨著對血吸蟲病保護性免疫、發病機制、肉芽腫形成調節機制的研究，以及現代生物化學及分子生物學在寄生蟲領域的應用，篩選出一大批血吸蟲疫苗候選分子。上世紀九十年代中期，TDR資助了曼氏血吸蟲的6個疫苗候選分子的研究，包括谷胱甘肽S-轉移酶(GST)、副肌球蛋白(Sm97)、輻射疫苗5號抗原(IrV-5)、磷酸丙糖異構酶(TPI)、23kDa膜抗原(Sm23)、脂肪酸結合蛋白(Sm14)，結果顯示獲得的保護水平均未超過WHO為抗原進入臨床試驗制定的40％的標準。疫苗研制的不理想，一定程度上歸因于血吸蟲為躲避宿主體內環境的排斥而發生的免疫逃逸。

過去幾年，血吸蟲分子生物學領域飛速發展，基因組學、轉錄組學以及大部分蛋白組學已基本完成，人們發現了新的一批頗具研究前景的疫苗候選分子。2003年，巴西科學家破譯曼氏血吸蟲基因組；2006年，中國科學家破譯日本血吸蟲基因組，這為認識血吸蟲生物學特征、開發抗血吸蟲藥物以及研制血吸蟲疫苗奠定了理論基礎。

Tetraspanin是一類進化上保守的細胞表面蛋白，幾乎遍布于所有類型的細胞和組織，其主要作用是介導蛋白分子間的相互作用，參與了各種各樣的生物學過程，譬如卵細胞的受精、宿主對感染的易感性、癌細胞的轉移、中樞神經系統和免疫系統的細胞間相互作用等。曼氏血吸蟲體被表面發現的Tetraspanin(TSP-2)能夠產生針對血吸蟲病的較高的保護力，它與大多數真核細胞包括T細胞和B細胞表面受體同源，可能與抑制血吸蟲的免疫逃避機制有關。它是目前最新的曼氏血吸蟲疫苗候選分子。而其在日本血吸蟲的是否存在同源基因片段以及該同源基因的功能尚未見報道。

發明內容：

本發明所要解決的第一個技術問題是提供一種日本血吸蟲中國大陸株的TSPs(tetraspanins，四次跨膜蛋白)的胞外環2(EC-2)多肽Sj-TSP-2的編碼基因及其保守性變異體。該編碼基因具有如下所示的序列(Seq?ID?No.1)：

GCAATAATAGAAAAGCCGAAGGTGAAAAGACATGTCACTACAGCATTAAAAGACCTTGTAGGACAATACGGACACGATAGACACTTAGACAAAGTTTTGGACGAAATTCAAGATAAATTACAATGTTGTGGTGCCGAATCGCCTGCTGATTATTCTCGAGGACCACCTCCATCATGTAAGAATTATAATGAGGGATGCATTGGTAAAGTCACCGATCTGACTAAAAAGCACCTAAATGCCACC。