[發(fā)明專利]木聚糖酶活力的測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810249673.5
• 申請(qǐng)日: 2008-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN101477035A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張永勤;王哲平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/27
• 分類號(hào): G01N21/27
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種木聚糖酶活力的測(cè)定方法，其特征是：

A，制作用MBTH法測(cè)得的木糖吸光度值與木糖濃度的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)關(guān)系曲線；

B，用MBTH法檢測(cè)待測(cè)木聚糖酶水解木聚糖后產(chǎn)生的相當(dāng)于木糖的吸光度值；根據(jù)上一步驟制作的木糖濃度與測(cè)得的木糖吸光度值之間的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)關(guān)系曲線確定待測(cè)木聚糖酶的酶解產(chǎn)物中在單位時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)生的相當(dāng)于木糖的還原糖的含量，以此來推算木聚糖酶的活力；

上述步驟A的具體步驟是：分別取6-15組具有不同濃度的木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL，濃度范圍在0-32微克/毫升之間，加入2mL?0.5當(dāng)量的NaOH溶液，混勻，取1.2mL加入到試管中做三個(gè)平行樣，再加入MBTH試劑0.6mL于75-85℃水浴加熱15-25min后趁熱加入硫酸鐵銨試劑1.2mL，室溫冷卻后于波長(zhǎng)620-680nm處測(cè)定吸光度值；根據(jù)每組木糖濃度與測(cè)得的吸光度值之間的關(guān)系繪制標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)關(guān)系曲線；

上述步驟B的具體步驟是：將9.9mL木聚糖溶液其濃度為2-4mg/mL，加入到錐形瓶中于30-40℃的水浴搖床中預(yù)熱8-12min，加入預(yù)熱至相應(yīng)溫度的木聚糖酶溶液0.1mL進(jìn)行水解反應(yīng)，水解時(shí)間為60min以內(nèi)，取水解液2mL，迅速加入到2mL?0.5當(dāng)量的NaOH溶液中，混勻，取1.2mL加入到試管中做三個(gè)平行樣，再加入MBTH試劑0.6mL于75-85℃水浴加熱20-30min后趁熱加入硫酸鐵銨試劑1.2mL，室溫冷卻后于波長(zhǎng)620-680nm處測(cè)定吸光度值，根據(jù)步驟A制作的木糖濃度與測(cè)得的木糖吸光度值之間的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)關(guān)系曲線確定酶解產(chǎn)物中所含有的相當(dāng)于木糖的還原糖濃度，以此來推算木聚糖酶的活力；木聚糖酶的活力單位可被定義為在上述條件下每分鐘產(chǎn)生1nM相當(dāng)于木糖的量為一個(gè)酶活力單位；其中MBTH試劑的制法是3mg/mL的3-甲基-2-苯并噻唑酮腙溶液和1mg/mL的二硫蘇糖醇溶液?等量混合即得，現(xiàn)用現(xiàn)配，一天內(nèi)有效。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的木聚糖酶活力的測(cè)定方法，其特征是：上述硫酸鐵銨試劑的制法是將(FeNH4(SO4)2)·12H2O，氨基磺酸，鹽酸分別加入到水中，使其溶解，并使各成分濃度分別為0.5％，0.5％，0.5當(dāng)量/升。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的木聚糖酶活力的測(cè)定方法，其特征是：上述木聚糖來源為樺木(birchwood)木聚糖或櫸木(beechwood)木聚糖。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的木聚糖酶活力的測(cè)定方法，其特征是：上述木聚糖溶液以50mM的丁二酸或醋酸溶液為溶劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的木聚糖酶活力的測(cè)定方法，其特征是：上述測(cè)定吸光度值的最佳波長(zhǎng)為650nm。?