[發明專利]褐點石斑魚心臟細胞系的構建方法

無效

• 申請號: 200810249565.8
• 申請日: 2008-12-26
• 公開（公告）號: CN101451121A
• 公開（公告）日: 2009-06-10
• 發明（設計）人: 樊廷俊;魏云波;姜國建
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12N5/06
• 分類號: C12N5/06
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司
• 代理人: 張中南

1.、一種褐點石斑魚心臟細胞系的構建方法，首先對鮮活褐點石斑魚用 濃度均為1000單位／毫升的青霉素和鏈霉素的高雙抗海水消毒處理24 小時，以75％酒精再次消毒，置于超凈工作臺中解剖取下心臟組織， 磷酸鹽緩沖液漂洗后剪成大致1mm的組織塊；用濃度為0.0625％-0.12 5％的胰蛋白酶對心臟組織塊消化5-10分鐘，并離心收集心臟組織塊； 將該心臟組織塊用含有5％胎牛血清和0.25‰-1‰硫酸軟骨素的pH?值 為7.0-7.4?的DMEM/F12?培養液充分懸浮，并均勻接種于多個25?毫 升培養瓶中，在22-24℃下正置干貼16-20?小時后，每瓶加入5?毫升 褐點石斑魚心臟細胞專用增殖培養液，置22-24℃生化培養箱中培養， 每隔3-5?天吸出2.5?毫升上述25?毫升培養瓶中的培養液，再添加 2.5?毫升上述褐點石斑魚心臟細胞專用增殖培養液；待褐點石斑魚心 臟細胞長成單層后，再使用濃度為0.125％-0.25％胰蛋白酶溶液消化 ，按1?瓶傳2?瓶的方式進行傳代培養；所述的褐點石斑魚心臟細胞 專用增殖培養液配方為含有20％胎牛血清和0.25‰-1‰比例的硫酸軟 骨素、pH?值為7.0-7.4?的DMEM/F12培養液。

2.、如權利要求1?所述的構建方法，其特征是在上述褐點石斑魚心臟細 胞專用增殖培養液中又添加占上述專用增殖培養液0.01‰-0.02‰比例 的人堿性成纖維細胞生長因子和占上述專用增殖培養液0.04‰-0.06‰ 比例的I?型人胰島素樣生長因子。