[發(fā)明專利]O139群霍亂弧菌檢測用組合物、試劑盒和檢測方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810247464.7
• 申請(qǐng)日: 2008-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN101768633A
• 公開（公告）日: 2010-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡劍平;龔成;吳麗娟;楊輝;胡繼紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蔡劍平
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/10
• 代理公司: 北京德琦知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11018
• 代理人: 徐江華;王珍仙

1.一種用于特異性檢測樣品中O139群霍亂弧菌的組合物，其中包括下列 引物：上游引物：5′-TgATgTTgTgggATAAgCAATCTT-3′，

下游引物：5′-CTCAgCAATgCggTggTCTA-3′。

2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中進(jìn)一步包括探針：

5′-熒光基團(tuán)-AACCCgCCCTTCTAATgAACACgCCA-熒光淬滅基團(tuán)-3′。

3.如權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述熒光基團(tuán)為Tet，所述熒光淬滅 基團(tuán)為ECLIPSE。

4.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中進(jìn)一步包括另一對(duì)引物：

上游引物：5′-ATgCCAAgAggACAgAgTgAgT-3′，

下游引物：5′-TCAAACTAATTgAggTggAAACATATCC-3′。

5.如權(quán)利要求4所述的組合物，其中進(jìn)一步包括探針：

5′-熒光基團(tuán)-AACCCgCCCTTCTAATgAACACgCCA-熒光淬滅基團(tuán)-3′， 和

5′-熒光基團(tuán)-TCgTgCCTAACAAATCCCgTCTgAgTTCCT-熒光淬滅基團(tuán) -3′，并且在兩個(gè)探針中分別使用不同的熒光基團(tuán)。

6.如權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述的兩對(duì)熒光基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán) 為：Tet和ECLIPSE，以及FAM和ECLIPSE。

7.一種用于特異性檢測樣品中O139群霍亂弧菌的試劑盒，其中包括PCR 反應(yīng)體系，和權(quán)利要求1～6中任一項(xiàng)所述的組合物。

8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其中所述PCR反應(yīng)體系為實(shí)時(shí)定量PCR 反應(yīng)體系。

9.一種特異性檢測樣品中O139群霍亂弧菌的方法，包括：

提取樣品中的細(xì)菌基因組DNA；

使用權(quán)利要求1～6中任一項(xiàng)所述的組合物，或使用權(quán)利要求7或8所述的 試劑盒，用PCR法擴(kuò)增所述細(xì)菌基因組DNA；

對(duì)PCR反應(yīng)的結(jié)果進(jìn)行分析，

其中，所述樣品為食品。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述PCR法的反應(yīng)條件為：

95±2℃預(yù)變性超過1min，95±2℃變性超過5s，60±2℃延伸超過10s，共 反應(yīng)超過30個(gè)循環(huán)，最后在72±2℃下延伸超過2min；或

95±2℃預(yù)變性超過1min，95±2℃變性超過5s，60±2℃延伸超過10s，共 反應(yīng)超過30個(gè)循環(huán)。