[發(fā)明專利]亞全能干細(xì)胞、其制備方法及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810240040.8
• 申請日: 2008-12-17
• 公開（公告）號: CN101748096A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙寶娜;韓之海
• 申請（專利權(quán)）人: 北京漢氏聯(lián)合生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08;A61K48/00;A61K35/48;A61K35/44;A61P7/06;A61P37/02;A61P25/00;A61P37/06;A61P39/06
• 代理公司: 北京國帆知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11334
• 代理人: 王俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及干細(xì)胞領(lǐng)域，具體地涉及一種其來源于剪斷的人類臍帶或 胎盤的亞全能干細(xì)胞。同時(shí)，本發(fā)明也涉及該亞全能干細(xì)胞的制備方法，以 及該亞全能干細(xì)胞的用途。

背景技術(shù)

人體是由萬億個(gè)細(xì)胞構(gòu)成的。細(xì)胞是人體的基本結(jié)構(gòu)單位和功能單位， 由干細(xì)胞分化而來，因此干細(xì)胞是人體各種組織器官的起源細(xì)胞。干細(xì)胞具有 自我復(fù)制和多向分化的特征。在正常生殖生理過程中，干細(xì)胞由受精卵分化而 來。受精卵最初發(fā)育形成原始胚胎干細(xì)胞，后者具有形成完整個(gè)體的全部潛能。 原始胚胎干細(xì)胞進(jìn)一步分化增殖形成囊胚樣結(jié)構(gòu)，其內(nèi)層細(xì)胞群的細(xì)胞也稱胚 胎干細(xì)胞。囊胚內(nèi)層的單個(gè)胚胎干細(xì)胞不能形成一個(gè)完整的個(gè)體，但具有形成 人體各種組織的全能性。囊胚胚胎干細(xì)胞繼續(xù)分化發(fā)育，逐步形成胎兒各器官 的功能執(zhí)行細(xì)胞，同時(shí)以不對稱分裂增殖的模式在機(jī)體組織特別是造血組織， 包括連接胎兒和母體的胎盤臍帶血、骨髓、外周血、肝和脾中保留有不同分化 潛能的干細(xì)胞。在整個(gè)胎兒發(fā)育到成年這個(gè)漫長而復(fù)雜的過程中，干細(xì)胞逐級 喪失其全能性，形成亞全能干細(xì)胞(Pluripotent?stem?cell，PSC)、多能干細(xì)胞 (Multipotent?stem?cell)和專能干細(xì)胞(Specialized?stem?cell)，后者按分化功 能分別稱造血干細(xì)胞、血管干細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞，等等。這些處于不同發(fā)育階 段的干細(xì)胞在人體組織器官的發(fā)育生長、損傷修復(fù)過程中發(fā)揮著決定性的作 用，因此干細(xì)胞可以用來新陳代謝、修復(fù)組織器官，使機(jī)體活力旺盛而保持健 康狀況。

迄今為止，人們對造血干細(xì)胞等專能干細(xì)胞的了解和臨床使用比較深入， 對胚胎干細(xì)胞的了解也有長足的進(jìn)展，但對亞全能干細(xì)胞，即在發(fā)育階段及分 化能力上與胚胎干細(xì)胞接近，表達(dá)胚胎干細(xì)胞的許多特征，又具備多能干細(xì)胞 的許多生物學(xué)特征，移植到體內(nèi)不產(chǎn)生畸胎瘤，這樣一類干細(xì)胞了解甚少。

但是，亞全能干細(xì)胞屬于成體干細(xì)胞范疇，避免了類似胚胎干細(xì)胞的醫(yī) 學(xué)倫理問題，其在臨床上具有廣闊現(xiàn)實(shí)的應(yīng)用前景。因此，亞全能干細(xì)胞已 經(jīng)成為干細(xì)胞研究的一個(gè)熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明一個(gè)目的是提供一種亞全能干細(xì)胞，其來源于剪斷的人類 臍帶或胎盤，可以用作基因治療藥物的載體細(xì)胞及用于制備治療細(xì)胞 損傷或細(xì)胞衰老疾病的藥物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備亞全能干細(xì)胞的方法。

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供上述亞全能干細(xì)胞的用途。

為達(dá)上述目的，本發(fā)明提供了一種亞全能干細(xì)胞，其特征在于： 其來源于剪斷的人類臍帶或胎盤，表達(dá)標(biāo)志分子CD151和Sox-2， 不表達(dá)CD34，還表達(dá)一些其它胚胎干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、 神經(jīng)干細(xì)胞和血管干細(xì)胞的其它主要特異性免疫標(biāo)志，包括 OCT4、巢蛋白、CD90、CD29、CD13、CD166、CD105、CD44、CD73、 CD49e、神經(jīng)節(jié)苷脂GD2和HLA-I。不表達(dá)CD184、CD31、CD45、 CD133、CD106、CD11b、CD271、CD41、CD61、CD42b和HLA-II。 其中OCT4是胚胎干細(xì)胞的一種特異性標(biāo)志。CD151屬于一個(gè) 廣泛表達(dá)的表面分子，在部分干細(xì)胞、表皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、 樹束狀細(xì)胞等細(xì)胞表達(dá)，在淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞不表達(dá)。CD184 是趨化因子受體4(CXCR4)，在淋巴細(xì)胞、樹束狀細(xì)胞、單核細(xì)胞、 粒細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞和CD34+干細(xì)胞上有表達(dá)

本發(fā)明亞全能干細(xì)胞的特征在于：其在培養(yǎng)容器中貼壁生長，能 向人體內(nèi)、中、外胚層組織，包括但不限于血管、神經(jīng)、肝臟、心肌、 骨、軟骨和脂肪組織分化，注射至動物體內(nèi)不產(chǎn)生畸胎瘤。

本發(fā)明提供了一種從剪斷的人類臍帶或胎盤制備亞全能干細(xì)胞的 方法，該方法包括下列步驟：

a.無菌采集剪斷的人類臍帶和/或胎盤；

b.進(jìn)行組織破碎，蛋白酶降解組織，過篩，分離得到原代單個(gè)核細(xì) 胞；

c.將原代單個(gè)核細(xì)胞接種于裝有干細(xì)胞培養(yǎng)液I或II的培養(yǎng)容 器中貼壁生長，蛋白酶消化后培養(yǎng)擴(kuò)增傳代四代以上，收集干細(xì) 胞，分裝后液氮低溫凍存；