[發(fā)明專利]亞全能干細胞、其制備方法及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810240040.8
• 申請日: 2008-12-17
• 公開（公告）號: CN101748096A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發(fā)明（設計）人: 趙寶娜;韓之海
• 申請（專利權）人: 北京漢氏聯(lián)合生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08;A61K48/00;A61K35/48;A61K35/44;A61P7/06;A61P37/02;A61P25/00;A61P37/06;A61P39/06
• 代理公司: 北京國帆知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11334
• 代理人: 王俊

1.一種從剪斷的人類臍帶或胎盤制備亞全能干細胞的方法，該方法包括下列步驟：?

a.無菌采集剪斷的人類臍帶和/或胎盤；?

b.進行組織破碎，蛋白酶降解組織，過篩，分離得到原代單個核細胞；?

c.將原代單個核細胞接種于裝有干細胞培養(yǎng)液I或II的培養(yǎng)容器中貼壁生長，蛋白酶消化后培養(yǎng)擴增傳代四代以上，收集干細胞，分裝后液氮低溫凍存，建亞全能干細胞種子庫，?

其中，干細胞培養(yǎng)液I的制備過程如下：50-70%體積的DMEM/F12培養(yǎng)液和30-50%體積的MCDB-201培養(yǎng)液混合成基礎培養(yǎng)液后，再添加下列終濃度的組分：2-10%體積的血清，10^-8mol/L的地塞米松，10-50mg/mL的ITS，0.1-10mmol/L的谷氨酰胺，1-100ng/mL的人表皮細胞生長因子和1-100ng/mL的堿性成纖維細胞生長因子；干細胞培養(yǎng)液II的制備過程如下：50-70%體積的DMEM/F12培養(yǎng)液和30-50%體積的MCDB-201培養(yǎng)液混合，再添加下列終濃度的組分：0.1-5%W/V的人血清白蛋白，1-100μg/mL的亞麻酸，1-100μg/mL的亞油酸，0.1-5%體積的非必需氨基酸，10^-8mol/L的地塞米松，10-50mg/mL的ITS，0.1-10mmol/L的谷氨酰胺，1-100ng/mL的人表皮細胞生長因子和1-100ng/mL的堿性成纖維細胞生長因子;?

其中所述的亞全能干細胞，其來源于剪斷的人類臍帶或胎盤，表達標志分子CD151和Sox-2，不表達CD34。?

2.根據(jù)權利要求1所述的制備亞全能干細胞的方法，其中所述的蛋白酶是膠原酶I或胰蛋白酶。?

3.如權利要求1或2所述方法制成的亞全能干細胞，其特征在于：其還表達標志分子OCT4、巢蛋白、CD90、CD29、CD13、CD166、CD105、CD44、CD73、CD49e、神經(jīng)節(jié)苷脂GD2和HLA-I；其不表達CD184、CD31、CD45、CD133、CD106、CD11b、CD271、CD41、CD61、CD42b和HLA-II。?

4.根據(jù)權利要求3所述的亞全能干細胞，其特征在于：其在培養(yǎng)容器中貼壁生長，能向人體內(nèi)、中、外胚層組織分化，注射至動物體內(nèi)不產(chǎn)生畸胎瘤。?

5.根據(jù)權利要求4所述的亞全能干細胞，其特征在于：所述胚層組織是血管、神經(jīng)、肝臟、心肌、骨、軟骨和脂肪組織。

6.權利要求3至5中任一權利要求所述的亞全能干細胞在制備用于基因治療的藥物中作為載體細胞的用途。

7.權利要求3至5中任一權利要求所述的亞全能干細胞在制備用于治療細胞損傷或細胞衰老疾病的藥物中的用途。

8.權利要求3至5中任一權利要求所述的亞全能干細胞在制備促進干細胞向成脂細胞、成骨細胞、成軟骨、心肌細胞、神經(jīng)細胞、肝細胞轉(zhuǎn)化及刺激造血的藥物中的用途。

9.權利要求3至5中任一權利要求所述的亞全能干細胞在制備用于治療大腦損傷疾病的藥物中的用途。

10.權利要求3至5中任一權利要求所述的亞全能干細胞在制備用于治療免疫調(diào)節(jié)異常疾病的藥物中的用途。

11.權利要求3至5中任一權利要求所述的亞全能干細胞在制備用于治療移植物抗宿主病的藥物中的用途。