[發明專利]自動物樣品中提取喹諾酮類和磺胺類化合物的方法及其專用免疫親和吸附劑

無效

• 申請號: 200810239225.7
• 申請日: 2008-12-04
• 公開（公告）號: CN101455958A
• 公開（公告）日: 2009-06-17
• 發明（設計）人: 沈建忠;李存;張素霞;史為民;萬宇平;江海洋;曹興元;馮才偉;李建成;王戰輝
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: B01J20/281
• 分類號: B01J20/281;C07D215/56;C07D261/16
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢;任鳳華

1、一種用于自動物樣品中提取喹諾酮類化合物和/或磺胺類化合物的免疫親和吸附劑，它是由固相載體和與其偶聯的諾氟沙星單克隆抗體和/或磺胺甲噁唑單克隆抗體組成；所述諾氟沙星單克隆抗體和磺胺甲噁唑單克隆抗體分別是以諾氟沙星半抗原和磺胺甲噁唑半抗原與載體蛋白的偶聯物為免疫原得到的抗體；所述喹諾酮類化合物為下述13種化合物中的至少一種：環丙沙星、諾氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星、依諾沙星、麻保沙星、洛美沙星、單諾沙星、恩諾沙星、沙拉沙星、二氟沙星、噁喹酸和氟甲喹；所述磺胺類化合物為下述6種化合物中的至少一種：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲噻二唑、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺甲噁唑。

2、根據權利要求1所述的吸附劑，其特征在于：所述諾氟沙星單克隆抗體為諾氟沙星鼠單克隆抗體；所述磺胺甲噁唑單克隆抗體為磺胺甲噁唑鼠單克隆抗體。

3、根據權利要求2所述的吸附劑，其特征在于：所述諾氟沙星鼠單克隆抗體由保藏號為C6MCC?No.2573的諾氟沙星單克隆雜交瘤細胞株C-3-2產生；所述磺胺甲噁唑鼠單克隆抗體由保藏號為CGMCC?No.2572的磺胺甲噁唑單克隆雜交瘤細胞株C-3-1產生。

4、以權利要求1-3中任一所述的免疫親和吸附劑為填料的免疫親和色譜柱。

5、含有權利要求1-3中任一所述的免疫親和吸附劑的試劑盒或含有權利要求4所述的免疫親和色譜柱的試劑盒。

6、根據權利要求5所述試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還包括洗脫液、洗滌液和保存液；

所述洗脫液由甲醇、純水和28％氨水(體積百分含量)溶液組成，所述洗脫液中，

甲醇、純水和28％氨水溶液的體積比為90:9.8:0.2；

所述洗滌液為0.01M、pH?7.4的磷酸鹽緩沖液；

所述保存液為在所述洗滌液中添加NaN₃得到的溶液。

7、一種自動物樣品中提取喹諾酮類化合物和/或磺胺類化合物的方法，包括以下步驟：

1)樣品的前處理：

取動物組織樣品勻漿物，加入提取液進行提取，然后進行離心力是2000g-3000g的離心，取上清液作為樣品溶液；所述提取液由甲醇和水組成，所述提取液中甲醇和水的體積比為4：1；所述離心力優選為2400-2500g；

2)將步驟1)得到的樣品溶液與權利要求6所述的洗滌液混合，過權利要求4所述的免疫親和色譜柱，然后依次用權利要求6所述的洗滌液、水、權利要求6所述的洗脫液進行洗脫，收集得到喹諾酮類化合物和/或磺胺類化合物溶液；

所述喹諾酮類化合物為下述13種化合物中的至少一種：環丙沙星、諾氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星、依諾沙星、麻保沙星、洛美沙星、單諾沙星、恩諾沙星、沙拉沙星、二氟沙星、噁喹酸和氟甲喹；所述磺胺類化合物為下述6種化合物中的至少一種：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲噻二唑、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺甲噁唑。

8、根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述動物組織樣品包括肌肉、肝。

9、諾氟沙星鼠單克隆抗體，由保藏號為CGMCC?No.2573的諾氟沙星單克隆雜交瘤細胞株C-3-2產生；

和/或磺胺甲噁唑鼠單克隆抗體，由保藏號為CGMCC?No.2572的磺胺甲噁唑單克隆雜交瘤細胞株C-3-1產生；

產生諾氟沙星鼠單克隆抗體的雜交瘤細胞株C-3-2，其保藏號為CGMCC?No.2573；

和/或產生磺胺甲噁唑鼠單克隆抗體的雜交瘤細胞株C-3-1，其保藏號為CGMCCNo.2572。

10、一種檢測動物樣品中喹諾酮類化合物和/或磺胺類化合物的方法，是用權利要求7或8所述的方法從動物樣品中提取得到喹諾酮類化合物和/或磺胺類化合物后，再對喹諾酮類化合物和/或磺胺類化合物進行定量檢測；所述喹諾酮類化合物為下述13種化合物中的至少一種：環丙沙星、諾氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星、依諾沙星、麻保沙星、洛美沙星、單諾沙星、恩諾沙星、沙拉沙星、二氟沙星、噁喹酸和氟甲喹；所述磺胺類化合物為下述6種化合物中的至少一種：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲噻二唑、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺甲噁唑。