[發明專利]快速同步檢測沙眼衣原體、細小脲原體和解脲脲原體的試劑盒

有效

• 申請號: 200810236989.0
• 申請日: 2008-12-23
• 公開（公告）號: CN101497926A
• 公開（公告）日: 2009-08-05
• 發明（設計）人: 王業富;呂振興;周立;唐景峰;張長明
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 黃瑞棠

技術領域

本發明涉及一種性傳播疾病病原體基因檢測試劑盒，具體涉及一種同步檢測 沙眼衣原體、細小脲原體和解脲脲原體的試劑盒，具有靈敏度高、特異性強、快 速的特點。

背景技術

解脲支原體(Ureaplasma?urealyticum，簡稱UU)和沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，簡稱CT)是常見的性傳播疾病病原體，在臨床非淋菌性尿道炎(簡 稱NGU)病人中，二者常常呈共同感染狀態；在性傳播疾病中解脲脲原體與非淋 菌性尿道炎、附睪炎有關；與前列腺炎、女性尿道癥狀、腎盂腎炎、盆腔炎有明 顯相關性或提示有病原學作用。

近年來解脲支原體的致病機理和流行病學研究得到了充分的重視。最近的研 究表明，解脲支原體應該分為兩個獨立的種，即細小脲原體(Ureaplasma?parvum， 原解脲支原體生物一群)和解脲脲原體(Ureaplasma?urealyticum，原解脲支原 體生物二群，保留其原來的名稱)，生殖道分離到的解脲支原體以細小脲原體為 主，解脲支原體某些血清型跟致病密切相關，但是由于傳統分群和分型方法的缺 陷，提供的數據有限而不能確定這些觀點。用分子生物學方法對解脲支原體進行 更快速、更特異性地分群分型和定量對解脲支原體感染的致病機理和流行病學研 究至關重要。

沙眼衣原體是一種致病微生物，既不是細菌，也不是病毒。它可以引起尿道 感染，是淋病菌以外，較為常見的性傳播疾病。這種尿道炎的典型表現是尿道刺 癢、尿痛和排尿困難。在女性，還可同時有陰道炎、宮頸炎，甚至引起盆腔炎。 女性感染此病還會導致不孕、宮外孕。孕婦患病，其新生兒經產道感染也可誘發 眼結膜炎，或發生肺炎。沙眼衣原體感染可持續較長時間，需要及時而充分的治 療，否則容易遷延及復發。

近年來各種報道顯示，淋菌性尿道炎發病率下降，而非淋菌性尿道炎卻不斷 上升，居性傳播疾病的首位。非淋菌性尿道炎可有癥狀或無癥狀，亞臨床感染可 持續存在多年。無論有癥狀還是無癥狀，其后果同樣嚴重：除尿道炎、眼結膜炎 外，可引起其他生殖器官炎癥，如附睪炎、前列腺炎、輸精管炎、宮頸炎、陰道 炎、輸卵管炎及盆腔炎等，最后導致不育癥和異位妊娠，也可感染嬰兒引起結膜 炎和肺炎。男性同性戀者，可患直腸炎及咽炎。非淋菌性尿道炎常與淋病同時感 染。前者先出現淋病癥狀，經抗淋病治療后，淋球菌被青霉素殺死，而衣原體、 支原體依然存在。在感染1-3周后發病。臨床上很易被誤認為淋病未治愈或復發。 由此可見，非淋菌性尿道炎給人們的身心健康造成了極大的傷害，必須找到正確 有效的診斷方法。

近年來發展起來的熒光定量聚合酶鏈式反應(Fluorescence?Quantitative PCR，FQ-PCR)技術以其靈敏度高、速度快、特異性強等優點在基因表達水平分 析和定量檢測等方面得到了廣泛的應用，并且已經成為當前病毒核酸定量的主要 方法。國內目前已有關于丙肝、乙肝、支原體、艾滋病、結核定量檢測的試劑盒 上市。

實時TaqMan熒光定量PCR能夠避免這些問題。實時TaqMan熒光定量PCR通過序 列特異性TaqMan探針以閉管模式在擴增的同時檢測目標基因，從而可以增加特異 性和降低交叉污染的可能性。另外，不需要進一步的下游分析，節約了凝膠電泳 觀察結果的時間。在實時TaqMan熒光定量PCR中，PCR產物累積的每個循環都被實 時監控和分析，分析達到熒光閾值的循環數(Ct值)就可以直接報告出DNA起始拷 貝數。通過序列特異性引物和TaqMan探針，實時TaqMan熒光PCR能夠有效地鑒別 解脲支原體不同的生物群和基因型。

傳統的解脲支原體檢測方法主要是選擇培養法，常規的沙眼衣原體檢測方法 是免疫學方法，如：免疫熒光法，酶聯免疫吸附試驗等，這些方法勞動量大，耗 時，而且靈敏度低或特異性差。聚合酶鏈反應法(PCR)近年來在解脲支原體和 沙眼衣原體的臨床樣品檢測和解脲支原體分群分型中顯示了它的有效性而被廣 泛使用，但是PCR法需要對PCR產物進行后處理，不僅費時而且交叉污染容易導致 假陽性結果，并且對環境造成污染、對實驗人員造成潛在的危害。因此焏待開發 精確、靈敏、快速、無污染的臨床檢驗方法。

發明內容

本發明的目的就在于克服現有技術存在的缺點和不足，提供一種快速同步 檢測沙眼衣原體(CT)、細小脲原體(UP)和解脲脲原體(UU)的試劑盒(簡稱 本試劑盒)。

本發明的目的是這樣實現的：

一、本試劑盒的結構