[發(fā)明專利]產二十碳五烯酸油脂的腐霉及該油脂的發(fā)酵制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810236810.1
• 申請日: 2008-12-10
• 公開（公告）號: CN101434908A
• 公開（公告）日: 2009-05-20
• 發(fā)明（設計）人: 余龍江;盧美歡;范志永;朱敏;周蓬蓬
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 華中科技大學專利中心
• 代理人: 曹葆青

技術領域

本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵生產具有重要生理活性的多不飽和油脂的方法，具體涉及到產二十碳五烯酸油脂的腐霉及該油脂的發(fā)酵制備方法。

發(fā)明背景

二十碳五烯酸(Eicosapetaneioc?Acid，簡稱EPA，即5，8，11，14，17-二十碳五烯酸)屬于ω-3系列長鏈不飽和脂肪酸。分子式為C₂₀H₃₀O₂，相對分子量為302.6。因分子中的第一個雙鍵起始于甲基端的第三個碳原子，故屬于ω-3系列不飽和脂肪酸。結構式如下：

二十碳五烯酸室溫下是液體，不溶于水而易溶于無水乙醇、石油醚等有機溶劑中。

由于EPA屬于ω-3系列多不飽和脂肪酸，它們和ω-6系列的脂肪酸在動物體內不能相互轉化，人體能將從植物中攝取的α-亞麻酸微量地轉化為EPA，滿足一般人的健康需要。但是老年人、幼兒及糖尿病人則不能將α-亞麻酸有效地轉化為EPA，這些人必需從食物中直接攝取EPA。

二十碳五烯酸俗稱為“血管清道夫”，它具有以下幾方面的生理功能：(1)抗凝血、降血脂、預防動脈硬化等心血管疾病；(2)抗炎作用；(3)抗癌作用等。因此，EPA的研究開發(fā)應用已受到世界各國科學家的關注和重視。

EPA的天然來源主要是海產的魚類、貝類和一些海水藻類，如海狗油、海豹油、金槍魚、沙丁魚、白蛤等。其商業(yè)來源主要為深海魚油，但深海魚油中同時含有EPA和DHA，其中，EPA含量在4％-40％之間。目前，全球的深海魚油年產量約1000噸。隨著人類對自身健康要求的提高，人們對多不飽和脂肪酸的需求越來越多，尤其是隨著全球人口老齡化的趨勢不斷發(fā)展，對含有大量EPA，而不含DHA的油脂需求量日益增多。因此，僅僅依靠魚油資源已無法滿足日益擴大的市場需求。而且魚油腥味大，深加工成本很高。所以，深海魚油市場價一直很高，一般人難以接受。因此，開發(fā)來源廣泛、價格合理的含有大量EPA，而不含DHA的油脂新生物資源及其應用已成為全球關注的熱點。

目前，已發(fā)現(xiàn)含有EPA的微生物種類有：真菌、海水細菌、藻類。而從真菌中培養(yǎng)獲得EPA報道較多。目前，國外報道的EPA最高發(fā)酵產量為1.88g/L(參考文獻：Shimizu?S，Kawashima?H.Appl?Microbial?Biotechnol1989，32：1-4)，國內EPA最高發(fā)酵產量僅為253.7mg/L(參考文獻：楊革，王玉萍，李翔太等.多價不飽和脂肪酸發(fā)酵條件的初步研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，1997，23(2)：8-13)，與國外報道的最高水平及產業(yè)化應用都存在較大差距，迫切需要通過菌種篩選和選育獲得產EPA油脂的高產菌株及相應的發(fā)酵制備方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了產二十碳五烯酸油脂的腐霉及該油脂的發(fā)酵制備方法。

產二十碳五烯酸油脂的腐霉(Pythium?sp.)HUST-RBB12已于2008年12月8日在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏中心地址：武漢武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中心；郵政編碼：430072；保藏編號：M208247。

本發(fā)明的腐霉HUST-RBB12菌株具有以下微生物學特性：

(1)形態(tài)學特性：

菌落在PDA培養(yǎng)基中菌絲為白色棉毛狀，培養(yǎng)過程中菌落顏色無變化；菌絲無隔，孢子無色。

(2)培養(yǎng)學特性

在PDA培養(yǎng)基中，在20℃培養(yǎng)，該菌株生長快速，兩天即可長滿培養(yǎng)皿；

在液體種子培養(yǎng)基或是發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，菌絲分散良好，發(fā)酵液呈小米粥狀，菌絲球直徑小于5mm。

(3)生理特性

本發(fā)明的HUST-RBB12菌株是一種需氧菌，發(fā)酵培養(yǎng)時，在25℃顯示出最佳的生長能力。作為碳源，蔗糖、大米粉水解液、麥芽糖、葡萄糖最利于HUST-RBB12的生長；而用阿拉伯糖、半乳糖作為碳源時，菌體生長緩慢。

腐霉HUST-RBB12菌株是通過以下方法得到：

(1)菌株分離純化：取5g土樣，放于盛有45ml的無菌水(帶玻璃珠)的三角瓶中，振蕩10分鐘，將土樣打勻。取0.5ml轉于4.5ml無菌水中，依次稀釋至10^-4。取10^-2，10^-3，10^-4三個稀釋度，涂布于加入抗生素的PDA平板表面。于25℃培養(yǎng)至有霉菌長出，立刻挑取單菌落轉接、純化并做編號；