[發明專利]一種快速檢測三聚氰胺的膠體金檢測卡及其制備方法

有效

• 申請號: 200810236374.8
• 申請日: 2008-11-08
• 公開（公告）號: CN101413956A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發明（設計）人: 趙曉聯;趙春城;楊婷婷;蔡建榮;葉進;秦海萍;張凌裳;龔燕;吳杰;沈雯琰;王文靜
• 申請（專利權）人: 江蘇省蘇微微生物研究有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 無錫盛陽專利商標事務所（普通合伙）
• 代理人: 顧吉云

1.一種快速檢測三聚氰胺的膠體金檢測卡，其包括試紙條，所述試紙條封裝于檢測卡殼體中，所述檢測卡殼體上開有加樣孔和觀測孔，所述試紙條包括底板，其特征在于：所述試紙條的底板上依次設置有吸水紙、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊，所述吸水紙和所述金標墊分別設置在所述硝酸纖維素膜兩端，在所述硝酸纖維素膜的兩端結合處，所述吸水紙和金標墊的一小段重疊壓在所述硝酸纖維素膜上，所述樣品墊設置在所述金標墊的另一端，所述樣品墊的一小段重疊在所述金標墊上；所述金標墊上噴涂有金標抗三聚氰胺單克隆抗體；所述硝酸纖維素膜上依次噴涂有材質為三聚氰胺-卵清蛋白偶聯結合物的檢測線、材質為羊抗鼠IgG的質控線；

所述膠體金檢測卡的制備包括以下步驟：

⑴用碳二亞胺法偶聯三聚氰胺半抗原與卵清蛋白，形成偶聯物三聚氰胺-卵清蛋白作為包被抗原；

⑵用三聚氰胺-牛血清白蛋白偶聯抗原免疫的小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞雜交融合，制備雜交瘤細胞，篩選能夠穩定分泌抗三聚氰胺單克隆抗體的細胞株，制備抗三聚氰胺單克隆抗體；

⑶制備膠體金溶液；

⑷用制備好的膠體金溶液標記抗三聚氰胺單克隆抗體；

⑸用制備好的包被抗原以及羊抗鼠IgG處理硝酸纖維素膜；

⑹用制備好的金標抗三聚氰胺單克隆抗體處理金標墊；

⑺組裝金標試紙條；

所述三聚氰胺-卵清蛋白的制備，稱取三聚氰胺，溶于吡啶溶液中，分別加入10%~20%的琥珀醛酸溶液和氰基硼氫化鈉，室溫下攪拌反應該混合物1小時~3小時，然后低溫濃縮至干，得半抗原，取此半抗原，溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF）溶液中，滴加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺（EDC），攪拌反應20分鐘后，將該反應液滴加至卵清蛋白（OVA）溶液中，立即加入N-羥基硫代琥珀酰亞胺（Sulfo-NHS），室溫下攪拌過夜，磷酸鹽緩沖液（PBS）透析24小時~72小時，冷凍干燥后于-20℃~-40℃保存；上述反應成分的比例為：三聚氰胺：琥珀醛酸：氰基硼氫化鈉=?(10~1000)mg?：(50~8000)?μl?：(6~600)mg，半抗原：EDC：OVA：NHS?=?(10~2000)mg?：(5~10000)mg?：(10~2000)mg：（20~5000）mg。

2.根據權利要求1所述一種快速檢測三聚氰胺的膠體金檢測卡，其特征在于：所述樣品墊位置正對所述加樣孔；所述硝酸纖維素膜位置正對所述觀測孔。

3.一種快速檢測三聚氰胺的膠體金檢測卡的制備方法，其特征在于：其包括以下步驟：

⑴用碳二亞胺法偶聯三聚氰胺半抗原與卵清蛋白，形成偶聯物三聚氰胺-卵清蛋白作為包被抗原；

⑵用三聚氰胺-牛血清白蛋白偶聯抗原免疫的小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞雜交融合，制備雜交瘤細胞，篩選能夠穩定分泌抗三聚氰胺單克隆抗體的細胞株，制備抗三聚氰胺單克隆抗體；

⑶制備膠體金溶液；

⑷用制備好的膠體金溶液標記抗三聚氰胺單克隆抗體；

⑸用制備好的包被抗原以及羊抗鼠IgG處理硝酸纖維素膜；

⑹用制備好的金標抗三聚氰胺單克隆抗體處理金標墊；

⑺組裝金標試紙條；

所述三聚氰胺-卵清蛋白的制備，稱取三聚氰胺，溶于吡啶溶液中，分別加入10%~20%的琥珀醛酸溶液和氰基硼氫化鈉，室溫下攪拌反應該混合物1小時~3小時，然后低溫濃縮至干，得半抗原，取此半抗原，溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF）溶液中，滴加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺（EDC），攪拌反應20分鐘后，將該反應液滴加至卵清蛋白（OVA）溶液中，立即加入N-羥基硫代琥珀酰亞胺（Sulfo-NHS），室溫下攪拌過夜，磷酸鹽緩沖液（PBS）透析24小時~72小時，冷凍干燥后于-20℃~-40℃保存；上述反應成分的比例為：三聚氰胺：琥珀醛酸：氰基硼氫化鈉=?(10~1000)mg?：(50~8000)?μl?：(6~600)mg，半抗原：EDC：OVA：NHS?=?(10~2000)mg?：(5~10000)mg?：(10~2000)mg：（20~5000）mg。