[發(fā)明專利]一種快速檢測(cè)三聚氰胺的膠體金檢測(cè)卡及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810236374.8
• 申請(qǐng)日: 2008-11-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101413956A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-04-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙曉聯(lián);趙春城;楊婷婷;蔡建榮;葉進(jìn);秦海萍;張凌裳;龔燕;吳杰;沈雯琰;王文靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省蘇微微生物研究有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 無(wú)錫盛陽(yáng)專利商標(biāo)事務(wù)所（普通合伙）
• 代理人: 顧吉云

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及飼料及食品中的三聚氰胺含量的快速檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一 種快速檢測(cè)三聚氰胺的膠體金檢測(cè)卡及其制備方法。

(二)背景技術(shù)

三聚氰胺是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原 料，簡(jiǎn)稱三胺，又叫蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺。三聚氰胺是一種用途 廣泛的基本有機(jī)化工中間產(chǎn)品，最主要的用途是作為生產(chǎn)三聚氰胺甲醛樹(shù)脂 (MF)的原料。由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素，常被人為添加進(jìn)動(dòng)物飼 料及植物蛋白中以提高產(chǎn)品中蛋白質(zhì)含量，而長(zhǎng)期或反復(fù)大量食用含有三聚氰 胺的飼料或食物，會(huì)造成動(dòng)物或人類生殖、泌尿系統(tǒng)的損害，膀胱、腎部結(jié)石， 并可進(jìn)一步誘發(fā)膀胱癌。因此，有必要對(duì)飼料及食品中的三聚氰胺的含量進(jìn)行 檢測(cè)，目前采用較多的有高效液相色譜法，該方法具有很好的靈敏度和特異性， 但操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，不用適于對(duì)大批量樣品的檢測(cè)，且需要昂貴的儀器設(shè)備， 檢測(cè)成本高；也可以采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，此方法雖然操作相對(duì)簡(jiǎn)單，不 需要昂貴的儀器設(shè)備，檢測(cè)成本低，但是在檢測(cè)過(guò)程中需要重復(fù)多次洗滌，而 且要借助于酶標(biāo)儀讀數(shù)進(jìn)行測(cè)定，不能實(shí)現(xiàn)真正的一步法快速檢測(cè)。

(三)發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種快速檢測(cè)三聚氰胺的膠體金檢測(cè)卡，能 夠滿足現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的需要，檢測(cè)快速，攜帶方便，操作簡(jiǎn)單，無(wú)需特殊設(shè)備 和儀器，為此本發(fā)明者還提供了快速檢測(cè)三聚氰胺的膠體金檢測(cè)卡的制備方法， 其制備工藝簡(jiǎn)單，成本低。

一種快速檢測(cè)三聚氰胺的膠體金檢測(cè)卡，其包括試紙條，所述試紙條封裝 于檢測(cè)卡殼體中，所述檢測(cè)卡殼體上開(kāi)有加樣孔和觀測(cè)孔，所述試紙條包括底 板，其特征在于：所述試紙條的底板上依次粘貼有吸水紙、硝酸纖維素膜、金 標(biāo)墊、樣品墊，所述吸水紙和所述金標(biāo)墊分別粘貼在所述硝酸纖維素膜兩端， 在所述硝酸纖維素膜的兩端結(jié)合處，所述吸水紙和金標(biāo)墊的一小段重疊壓在所 述硝酸纖維素膜上，所述樣品墊粘貼在所述金標(biāo)墊的另一端，所述樣品墊的一 小段重疊在所述金標(biāo)墊上；所述金標(biāo)墊上噴涂有金標(biāo)抗三聚氰胺單克隆抗體； 所述硝酸纖維素膜上依次噴涂有材質(zhì)為三聚氰胺-卵清蛋白偶聯(lián)結(jié)合物的檢測(cè) 線、材質(zhì)為羊抗鼠IgG的質(zhì)控線。

其進(jìn)一步特征在于：所述樣品墊位置正對(duì)所述加樣孔，所述硝酸纖維素膜 位置正對(duì)所述觀測(cè)孔。

一種快速檢測(cè)三聚氰胺的膠體金試紙條的制備方法，其特征在于：其包括 以下步驟：

(1)用碳二亞胺法偶聯(lián)三聚氰胺半抗原與卵清蛋白，形成偶聯(lián)物三聚氰胺-卵 清蛋白作為人工抗原；

(2)用免疫原免疫的小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞雜交融合，制備雜交瘤細(xì) 胞，篩選能夠穩(wěn)定分泌抗三聚氰胺單克隆抗體的細(xì)胞株，制備抗三聚氰胺單克 隆抗體；

(3)制備膠體金溶液；

(4)用制備好的膠體金溶液標(biāo)記抗三聚氰胺單克隆抗體；

(5)用制備好的包被抗原以及羊抗鼠IgG處理硝酸纖維素膜；

(6)用制備好的金標(biāo)抗三聚氰胺單克隆抗體處理金標(biāo)墊；

(7)組裝金標(biāo)試紙條。

其進(jìn)一步特征在于：

所述三聚氰胺-卵清蛋白的制備：稱取三聚氰胺，溶于吡啶溶液中，分別加 入10％～20％的琥珀醛酸溶液和氰基硼氫化鈉，室溫下攪拌反應(yīng)該混合物1小時(shí) ～3小時(shí)，然后低溫濃縮至干，得半抗原，取此半抗原，溶于N，N-二甲基甲酰 胺(DMF)溶液中，滴加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)，攪拌反 應(yīng)20分鐘后，將該反應(yīng)液滴加至卵清蛋白(OVA)溶液中，立即加入N-羥基 硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)，室溫下攪拌過(guò)夜，磷酸鹽緩沖液(PBS)透析 24小時(shí)～72小時(shí)，冷凍干燥后于-20℃～-40℃保存；上述反應(yīng)成分的比例為：三 聚氰胺：琥珀醛酸：氰基硼氫化鈉＝(10～1000)mg：(50～8000)μl：(6-600)mg， 半抗原：EDC：OVA：NHS＝(10～2000)mg：(5～10000)mg：(10-2000)mg： (20～5000)mg；