[發(fā)明專利]一種檢測(cè)玉米赤霉烯酮的ELISA測(cè)試盒及制備及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810236336.2
• 申請(qǐng)日: 2008-11-07
• 公開（公告）號(hào): CN101413955A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐祖奇;張建中;毛麗華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 無錫益達(dá)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 無錫盛陽專利商標(biāo)事務(wù)所（普通合伙）
• 代理人: 顧吉云

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體為玉米赤霉烯酮的酶聯(lián)免疫分析用測(cè)試盒 及制備及檢測(cè)方法。

(二)背景技術(shù)

玉米赤霉烯酮(ZEN)可以由禾谷鐮刀菌、黃色鐮刀菌、粉紅色鐮刀菌、 串珠鐮刀菌、三線鐮刀菌、茄病鐮刀菌、木賊鐮刀菌、尖孢鐮刀菌等多種鐮刀 菌產(chǎn)生。在自然狀態(tài)下這些鐮刀菌主要侵染玉米，導(dǎo)致玉米的病毒和帶毒。特 別是當(dāng)玉米收獲季節(jié)遇到陰雨天時(shí)更易遭到感染。除玉米外，小麥、大麥、燕 麥也可感染這些鐮刀菌而帶毒。ZEN是一種類雌性激素毒素，動(dòng)物攝食后會(huì)產(chǎn) 生雌性激素亢進(jìn)毒素性反應(yīng)，玉米赤霉烯酮具有較強(qiáng)的生殖毒性和致畸作用， 可引起動(dòng)物發(fā)生雌激素中毒癥，主要癥狀有陰道和乳腺腫脹、子宮腫大、外翻、 導(dǎo)致動(dòng)物不孕或流產(chǎn)，對(duì)家禽特別是豬、牛和羊的影響較大，給畜牧業(yè)帶來經(jīng) 濟(jì)損失；玉米赤霉烯酮可直接通過污染的谷類等作物進(jìn)入人和動(dòng)物體內(nèi)，也可 通過被污染的肉、奶等動(dòng)物性食品進(jìn)入人體，其引起人中毒的癥狀主要表現(xiàn)為 無力、頭痛、頭暈、嘔吐、腹瀉和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的紊亂。

我國修訂的《糧食衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定小麥、玉米中ZEN的限量為60μg/kg。 歐盟委員會(huì)規(guī)則856/2005號(hào)規(guī)定谷物食品和谷物中玉米赤霉烯酮的最大限量為 20～100μg/kg，于2006年7月1日生效。目前也有許多國家制定了玉米赤霉烯 酮的限量標(biāo)準(zhǔn)，奧地利規(guī)定小麥、裸麥、硬質(zhì)小麥中不得超過60μg/kg，巴西、 法國、羅馬尼亞、俄羅斯、烏拉圭等國也制定了相應(yīng)的限量標(biāo)準(zhǔn)。因此，為了 保障人們的身體健康，必須要對(duì)食品中的ZEN進(jìn)行監(jiān)控。目前，ZEN的理化分 析技術(shù)主要有薄層色譜法、氣液相色譜法、質(zhì)譜和核磁共振等多種方法，由于 以上諸分析方法的樣品前處理比較復(fù)雜、操作時(shí)需專門的技術(shù)人員、檢測(cè)費(fèi)用 昂貴，不利于推廣應(yīng)用。

(三)發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述問題，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)玉米赤霉烯酮的ELISA測(cè)試盒，其 檢測(cè)快速、靈敏、準(zhǔn)確、可定量、操作簡便、無需貴重儀器設(shè)備，且對(duì)樣品純 度要求不高，特異性強(qiáng)，簡化了樣品預(yù)處理和純化過程，特別適用于大批量樣 品的檢測(cè)，為此本發(fā)明還提供了測(cè)試盒的制備及檢測(cè)方法。

一種檢測(cè)玉米赤霉烯酮的ELISA測(cè)試盒，其包括洗滌液、顯色液A、顯色 液B和終止液，其特征在于：其還包括包被板、玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品、玉米赤 霉烯酮單抗凍干品和酶標(biāo)記的羊抗鼠抗體凍干品。

一種檢測(cè)玉米赤霉烯酮的ELISA測(cè)試盒的制備：其特征在于：其包括以下 步驟，包被板的制備、玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品的制備、玉米赤霉烯酮單抗凍干品 的制備、酶標(biāo)記的羊抗鼠抗體凍干品的制備。

其進(jìn)一步特征在于：所述包被板包被固相抗原，其可采用96或48或24孔 微孔板，用10mmol/L～100mmol/L?pH9～10?Na₂CO₃-NaHCO₃的緩沖液作 為包被液，將嘔吐毒素-卵清蛋白(ZEN-OVA)稀釋至0.1μg/mL～1.0μg/mL，96或 48或24孔微孔板各孔加100μl，2℃～8℃放置過夜，棄去包被液，洗滌2次～5 次，按加入含1％～5％牛血清白蛋白，pH7～8的磷酸鹽緩沖液，2℃～8℃封閉過 夜，棄去封閉液，吹干，板條密封后置-20℃～-40℃冷凍保存；

所述玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品從玉米赤霉烯酮純品中稀釋得到，稀釋液為去離 子水，ZEN濃度為：0.001ng/mL～50ng/mL；