[發(fā)明專利]豬源大腸桿菌中抗銅基因pcoA的PCR檢測方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200810233785.1 | 申請日： | 2008-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN101445833A | 公開（公告）日： | 2009-06-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 侯春;貢嬌娜;竇秋燕;張智輝;孫放 | 申請（專利權(quán)）人： | 云南大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 昆明今威專利代理有限公司 | 代理人： | 楊宏珍 |
| 地址： | 650090*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 大腸桿菌 中抗銅 基因 pcoa pcr 檢測 方法 | ||
1、一種用PCR檢測豬源大腸桿菌中抗銅基因pcoA的方法，其特征在于該方法包括：用于PCR檢測的豬源大腸桿菌單菌落培養(yǎng)物的制備、抗銅基因pcoA的引物序列、PCR反應(yīng)液組成、PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件、及PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測方法。
2、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的用于PCR檢測的豬源大腸桿菌單菌落培養(yǎng)物的制備為：將分離到的待檢測的豬源大腸桿菌菌株劃線接種在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上，在37℃溫度下培養(yǎng)18-36h后得到單菌落。
3、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的抗銅基因pcoA的引物序列為：上游5’CGTCTCGACGAACTTTCCTG3’；下游：5’GGACTTCACGAAACATTCCC3’；。
4、如權(quán)利要求1或2或3所述的方法，其特征在于所述的PCR反應(yīng)液組成為：10x?PCR?buffer，10μM上游引物序，10μM下游引物序，10μM?dNTP，用一個(gè)無菌的0.5-10μL移液槍頭挑取一個(gè)單菌落作為DNA模板放入PCR反應(yīng)液中混勻，1.5-3.0?U?Taq酶，反應(yīng)體系20-50μL。
5、如權(quán)利要求1或2或3或4所述的方法，其特征在于所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件包括：94℃預(yù)變性5-10min；94℃變性1.75min、55℃退火1.5min、72℃延伸2min、共進(jìn)行30-35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min，于4℃下保存。
6、如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于將擴(kuò)增產(chǎn)物于0.8-2.0g/L的瓊脂糖凝膠電泳檢測及UV?I凝膠成像分析結(jié)果。
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