[發明專利]豬源大腸桿菌中抗銅基因pcoA的PCR檢測方法

無效

• 申請號: 200810233785.1
• 申請日: 2008-12-31
• 公開（公告）號: CN101445833A
• 公開（公告）日: 2009-06-03
• 發明（設計）人: 侯春;貢嬌娜;竇秋燕;張智輝;孫放
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/02
• 代理公司: 昆明今威專利代理有限公司
• 代理人: 楊宏珍

1、一種用PCR檢測豬源大腸桿菌中抗銅基因pcoA的方法，其特征在于該方法包括：用于PCR檢測的豬源大腸桿菌單菌落培養物的制備、抗銅基因pcoA的引物序列、PCR反應液組成、PCR擴增反應條件、及PCR擴增產物的檢測方法。

2、如權利要求1所述的方法，其特征在于所述的用于PCR檢測的豬源大腸桿菌單菌落培養物的制備為：將分離到的待檢測的豬源大腸桿菌菌株劃線接種在牛肉膏蛋白胨培養基平板上，在37℃溫度下培養18-36h后得到單菌落。

3、如權利要求1所述的方法，其特征在于所述的抗銅基因pcoA的引物序列為：上游5’CGTCTCGACGAACTTTCCTG3’；下游：5’GGACTTCACGAAACATTCCC3’；。

4、如權利要求1或2或3所述的方法，其特征在于所述的PCR反應液組成為：10x?PCR?buffer，10μM上游引物序，10μM下游引物序，10μM?dNTP，用一個無菌的0.5-10μL移液槍頭挑取一個單菌落作為DNA模板放入PCR反應液中混勻，1.5-3.0?U?Taq酶，反應體系20-50μL。

5、如權利要求1或2或3或4所述的方法，其特征在于所述的PCR擴增反應條件包括：94℃預變性5-10min；94℃變性1.75min、55℃退火1.5min、72℃延伸2min、共進行30-35個循環；72℃延伸10min，于4℃下保存。

6、如權利要求5所述的方法，其特征在于將擴增產物于0.8-2.0g/L的瓊脂糖凝膠電泳檢測及UV?I凝膠成像分析結果。