[發明專利]解淀粉類芽孢桿菌P17菌株,由其所得的低溫果膠酶及其分離純化方法

無效

• 申請號: 200810233628.0
• 申請日: 2008-11-24
• 公開（公告）號: CN101412982A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發明（設計）人: 魏云林;王大拓;季秀玲;井申榮;林連兵
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/26;C12R1/01
• 代理公司: 昆明今威專利代理有限公司
• 代理人: 賽曉剛

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體地，涉及解淀粉類芽孢桿菌(Paenibacillusamylolyticus)P17菌株，由其產生的低溫果膠酶及其分離純化方法。

背景技術：

果膠酶(Pectinases，EC.3.2.1.15)是指能夠分解果膠質(由D-半乳糖醛酸以α-1，4糖苷鍵連接形成的直鏈聚合物，部分被甲酯化)的，由多種酶組成的一類復合酶，它廣泛存在于高等植物、昆蟲和微生物中。果膠酶主要有兩種分類方法：1)根據底物優先法、水解類型和降解方式可以分為原果膠酶、果膠酯酶、果膠解聚酶2)根據最適作用pH分為酸性果膠酶和堿性果膠酶。

果膠酶主要應用于食品業，尤其是水果加工業，它可以有效地提高水果的出汁率，改善果汁的過濾效率，減少化學澄清劑的用量，改善果汁質量，簡化果汁加工工藝，縮短加工時間，提高生產效率、果汁產量和產品質量的穩定性。此外，果膠酶還可以應用于紡織、制漿造紙、麻類脫膠、木材防腐，甚至有報道用于治療胃結石等領域。

低溫果膠酶的發現不僅為果膠物質的低溫降解提供了可能，而且擴展了果膠酶的工業應用范圍。低溫果膠酶多由低溫微生物產生。Lund等人在研究果蔬腐壞病過程中發現了微生物果膠酶，在以后的幾十年里，國內外研究者對微生物果膠酶進行了大量的研究，但對微生物低溫果膠酶的研究則起步較晚，主要研究都集中在最近十多年。國內對低溫果膠酶的研究工作剛剛開展，有關低溫果膠酶的研究鮮有報道。國外對低溫果膠酶的研究主要集中在菌種篩選、鑒定、理化性質分析方面。Takasawa等從小麥幼苗中分離得到的嗜冷性核盤菌(Sclerotinia?borealis)產生低溫聚半乳糖醛酸酶，最適酶活溫度40～50℃，最適pH4.5，在5℃仍有最大活性的30％，室溫過夜或50℃保溫30min活性損失明顯，60℃活性弱。Laurent等從儲存于冷庫的根芹菜腐爛部位中分離出產生三種果膠酸裂解酶同工酶(PL?I、PL?II和PLIII)的淺黃金色單胞菌(Chryseomonas?luteola)。Truong等從南極冰水中首次分離出一株產低溫果膠酶的海洋微生物Pseudoalteromonas?haloplanktis，該菌株能產生兩種具有低溫果膠酸裂解酶活力的酶，最適酶活溫度30℃，最適pH分別為9和10。Miura，et?al.從深海沉積物中分離的新型隱球酵母菌(Cryptococcus?N6)產生的兩種低溫聚半乳糖醛酸酶(P36和P40)，最適作用溫度為50℃，在0℃分別保持有最高活性的25％和30％。P36和P40對壓力有很好的耐受性，所受的壓力緩慢升到100Mpa時，酶活力沒有發生變化。Birgisson，et?al.從凍土、被凍結的樹葉或樹枝中分離得到8株分泌胞外冷活性聚半乳糖醛酸酶的酵母，并對其中四株酵母進行了產酶條件的研究。最近關于微生物低溫果膠酶的報道，來自于Margesin，et?al，關于兩株木克拉酵母(Mrakia?frigida?A15和AG25)的研究。A15和AG25分別分離自高山冰川的冰塵和西伯利亞北部地區的沉積物中，它們的最適產酶溫度分別為5℃和1℃，其產酶溫度均低于它們的最適生長溫度。Margesin等對Mrakia?frigida?A15和AG25產生的低溫果膠酸裂解酶研究表明，最適酶活溫度30℃，最適pH分別為9.0和8.5，在0℃分別保持有最高活性的21％和16％，Ca²⁺是兩種酶活性的必須金屬離子。由于低溫果膠酶在低溫下仍能保持較高的活力和對熱敏感等特點已引起眾多學者的廣泛關注，已成為近年酶學研究的一個熱點。因此，對低溫果膠酶的研究不僅在理論上有著重要的意義，而且在工業應用上也具有巨大的潛在價值。

發明內容：

本發明的目的是提供一株產生低溫果膠酶的菌株P17，經16S?rRNA鑒定，將此菌株初步鑒定為解淀粉類芽孢桿菌(Paenibacillus?amylolyticus)。

本發明的另一目的是提供一種在低溫條件下具有較高活性的低溫果膠酶及其分離純化方法。

為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下的技術方案：

解淀粉類芽孢桿菌(Paenibacillus?amylolyticus)P17菌株，菌種保藏號為CGMCC?No.2640。