[發明專利]解淀粉類芽孢桿菌P17菌株,由其所得的低溫果膠酶及其分離純化方法

無效

• 申請號: 200810233628.0
• 申請日: 2008-11-24
• 公開（公告）號: CN101412982A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發明（設計）人: 魏云林;王大拓;季秀玲;井申榮;林連兵
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/26;C12R1/01
• 代理公司: 昆明今威專利代理有限公司
• 代理人: 賽曉剛

1.解淀粉類芽孢桿菌(Paenibacillus?amylolyticus)P17菌株，菌種保藏號為CGMCC?No.2640。

2.由權利要求1所述的低解淀粉類芽孢桿菌P17菌株產生低溫果膠酶的純化方法，將權利要求1所述的解淀粉類芽孢桿菌菌株P17接入液體LB培養基中，在13～25℃的條件下振蕩培養至指數生長期，將處于指數生長期的菌液轉接于液體發酵培養基中，13～25℃振蕩培養至穩定期初期即為產酶高峰期，將發酵液離心，取上清，濾紙過濾，得粗酶液；用截留分子量為10KDa的膜包將粗酶液的體積濃縮至原來的1/10；濃縮后的酶液加硫酸銨至60％～70％飽和度，離心取上清，繼續加硫酸銨至90％～100％，離心取沉淀，在pH8.0的KPB緩沖液透析過夜；將透析后的酶液離心，取上清液，上樣于已用pH8.0的KPB緩沖液平衡好的DEAE-Sepharose預裝柱，收集有活性的透過峰酶液，并用截留分子量為10KDa的濃縮管進行濃縮；用pH6.0的KPB緩沖液將濃縮酶液透析過夜，離心取上清，上樣于已用pH6.0的KPB緩沖液平衡好的CM-Sepharose預裝柱，洗脫，收集有活性的部分，即為純酶，

所述的發酵培養基的組成為：酵母粉0.2g/L，葡萄糖1g/L，硫酸銨2g/L，磷酸氫二鉀1g/L，氯化鉀0.5g/L，硫酸亞鐵0.01g/L，硫酸鎂0.5g/L，pH9.0。