[發明專利]硫酸酯化多糖中硫酸基的測定方法

無效

• 申請號: 200810233494.2
• 申請日: 2008-10-28
• 公開（公告）號: CN101393205A
• 公開（公告）日: 2009-03-25
• 發明（設計）人: 李寶才;張惠芬;張水花;秦誼;戴偉鋒;何靜;角仕云;畢艷艷;黃昆;劉建珍
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N5/00
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司
• 代理人: 金耀生

技術領域

本發明涉及一種硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基的測定方法，屬于化學分析方法領域。

技術背景

含有硫酸集團的糖復合物(glycoconjugates)，如糖蛋白(glycoprotein)、肽聚糖 (peptidoglycans)、蛋白聚糖(proteoglycan)以及硫酸酯化多糖(sulfated polysaccharides，SPS)是一大類重要的生物活性物質。具有抗凝血、活血化瘀、調節血 脂、抗腫瘤、抗病毒、增強細胞免疫和體液免疫功能、抗衰老、對機體細胞的保護等作用。

該類多糖的重要特征就是含有硫酸基，為多糖大分子鏈中單糖殘基的某一羥基被硫酸 基所取代。許多生物活性功能除與多糖結構、水溶性、分子量大小等有關外，與硫酸基的 含量有著直接的聯系。如藻酸硫酸化后具有抗凝血作用，含硫量為5.15％，具有強的類似 肝素的阻凝作用；當硫量達17％，呈現顯著的抗凝血作用；硫酸鹽陰離子對硫酸酯化多糖抑 制HIV是必須的離子結構，其抑制作用不僅與濃度呈量效關系，而且與分子中硫酸基含量 有關，含量越高，其抗HIV的作用越強，顯然硫酸基在抑制HIV的生長過程中起了重要作 用。

目前多糖中硫酸基常用的測定方法有灰分法、鹽酸水解—硫酸鋇法、硫酸鋇濁度法、 聯苯胺法等。在這些方法中前兩種屬常量分析，后兩種為微量分析。如硫酸鋇濁度法，稱 樣量為1～3mg，還要經水解等一系列樣品處理，其絕對誤差和相對誤差大在所難免。而灰 分法和鹽酸水解—硫酸鋇重量法報道敘述不具體、不規范，且兩種方法測定結果相差甚遠。

發明內容

本發明目的在于提供一種可靠的硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基的測定方法，對硫酸 酯化多糖及相關食品、功能食品、藥品中硫酸基的測定方法進行統一、規范操作程序，使 其分析方法具有可比性。

上述目的是這樣實現的：硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基含量的測定方法，測定步驟如 下：

1)稱取待測樣品0.1～0.4克(精確至0.0001克)，置于20ml帶蓋玻璃瓶中，用少 許去離子水潤濕，加入摩爾濃度為0.5～1.8mol/L的HCl溶液5～18ml，擰緊瓶蓋，在旋 渦混合器上充分混勻，在超級微量恒溫器上，于50～100℃下加熱水解1～12小時，在水 解過程中，間歇有規律地搖動小瓶。

2)取出玻璃瓶并冷卻至室溫，以慢速定性濾紙過濾，用去離子水洗滌殘渣至無SO₄^2-(以2mol/L?BaCl₂溶液檢驗，濾液收集約200ml)，攪拌下徐徐加入2mol/L?BaCl₂溶液5ml， 并加入2mol/L?HNO₃溶液5ml，溫和加熱30分鐘，取下靜置4小時。

3)用慢速定量濾紙過濾；再用去離子水洗至無Cl^-(1％AgNO₃溶液檢驗)，將濾紙及沉 淀物轉移至已在650～850℃恒重并稱重的瓷坩堝中，置于電爐上灰化，注意不能讓其燃燒， 然后轉移到馬福爐中于400℃加熱1小時，650～850℃加熱1小時；取出室溫冷卻5分鐘， 放入裝有CaCl₂的干燥器中，冷至室溫，稱量記錄；再在650～850℃加熱0.5小時，冷卻， 稱量記錄；重復上述操作，直至二次稱量相差不大于0.0002克。

4)然后計算SO₄^2-的含量。

本方法測定結果可靠，精密度、準確度好，而且所用設備儀器簡單，試劑易購，適用 于一般實驗室質量控制，仲裁分析，以及含硫酸酯化多糖的食品、保健食品、藥品中硫酸 基常量分析。

具體實施方式

硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基的測定方法，下面通過舉例作進一步詳細說明。

實施例1：