[發明專利]五唇蘭的無菌播種和組織培養方法

無效

• 申請號: 200810232857.0
• 申請日: 2008-10-07
• 公開（公告）號: CN101375670A
• 公開（公告）日: 2009-03-04
• 發明（設計）人: 李冬妹;葉秀磷;周強;伍成厚
• 申請（專利權）人: 順德職業技術學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 佛山市科順專利事務所
• 代理人: 梁紅纓

技術領域

本發明涉及一種五唇蘭的無菌播種和組織培養方法。

背景技術

五唇蘭(Doritis?pulcherrima?Lindl.)又稱朵麗蘭，本屬原種有兩個種， 我國只有一種，產于海南。附生或地生。目前有許多與蝴蝶蘭雜交的品種(朵 麗蘭系列)，是非常優秀的系列品種，商品價值高，需求量大。五唇蘭是極 其重要的雜交親本，由于其株型和花色都相當好，抗逆性又強，自身就具有 很高的觀賞價值。世界各國的蘭花育種工作者都非常重視它，但自然界生存 的不多，處于瀕危狀態。

目前，五唇蘭的繁殖主要采用分株繁殖，繁殖速度極慢，而其種子由于 胚發育不完全，在自然狀態下需與一些特殊的真菌共生才能萌發，實際上是 極其困難，萌發率和成苗率都很低。

發明內容

本發明是克服現有技術的不足而提供種子萌發率高，試管苗培育時間 短，生長健壯，可操作性強，應用價值高的一種五唇蘭的無菌播種和組織培 養方法。

為了達到上述目的，本發明是這樣實現的，其是一種五唇蘭的無菌播種 和組織培養方法，其特征在于選用海南產的原生種為材料，開花時，選擇健 康母株進行人工授粉，授粉后100-120天將果實取下，用70％-80％酒精浸泡 25-35秒后置于0.05％-0.15％的升汞溶液中消毒15-25分鐘，無菌水沖洗4～5 次后切開果實，用接種針將白色粉末狀的種子接種到種子萌發培養基上培養 25-30天直到出現原球莖和芽，培養溫度為25-28℃，利用原球莖和芽的混合 組織在繼代培養基上增殖25-35天，增殖溫度為25-28℃，使原球莖和芽增加 4-6倍，這類組織在壯苗培養基上培養25-35天后形成小苗，把小苗再轉到新 鮮壯苗培養基上培養，培養25-35天后瓶苗長至3-5厘米高時，把瓶苗移到 自然光下煉苗10-20天，光照度為1500～2000LX，而后從瓶中取出，洗凈根 部的培養基，移入水苔基質或火山石中栽培。

在所述種子萌發和壯苗所用的培養基中蔗糖濃度為2％，繼代培養基中 蔗糖濃度為1.5％。

所述的種子萌發培養基、繼代培養基及壯苗培養基的PH值為5.5-6， 在種子萌發培養基、繼代培養基及壯苗培養基中含有0.7％的瓊脂。

所述的種子萌發培養基包括VW培養基，并在每1升VW培養基中含有 6-芐基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升及10％的椰子汁。

所述的壯苗培養基包括VW培養基，并在每1升VW培養基中含有6-芐 基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升及馬鈴薯提取液100毫升/升。

所述的繼代培養基包括VW培養基，并在每1升VW培養基中含有6-芐 基嘌呤0.2毫克/升及萘乙酸0.5毫克/升。

本發明與現有技術相比的優點為，五唇蘭種子萌發率高，試管苗培育 時間短、生長健壯，具有可操作性強，應用價值高等優點。

具體實施方式

下面將結合實施例對本發明做進一步的詳述：

實施例一

包括下列主要步驟：

1、材料：選擇健康母株進行人工授粉，授粉后110天將果實取下作為 外植體用于播種；

2、無菌播種：果實用75％酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒 20分鐘，無菌水沖洗4～5次后切開果實，用接種針將白色粉末狀的種子接種 到種子萌發培養基中培養25天左右直到出現原球莖和芽，其培植溫度為27 ℃；種子萌發率在60-95％之間。該種子萌發培養基包括VW培養基，且在每升 VW培養基中含有6-芐基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升、10％的椰子 汁。

3、組織培養：為獲得更多的種苗，將在原球莖和芽的混合組織在繼代 培養基上增殖30天，增殖溫度為27℃，使原球莖和芽增加4-6倍。該繼代 培養基包括VW培養基，且在每升VW培養基中含有6-芐基嘌呤0.2毫克/升 及萘乙酸0.2毫克/升。

4、瓶苗移栽：將增殖后的原球莖和芽在壯苗培養基中培養30天后，瓶 苗長至3-5厘米高時，把瓶苗移到自然光下煉苗15天，其光照度為1800LX 而后從瓶中取出，洗凈根部的培養基，移入水苔基質或火山石中培養，保持 通風和適當的濕度，移栽的成活率達95％以上。該壯苗培養基包括VW培養基， 且在每升VW培養基中含有6-芐基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升及 馬鈴薯提取液100毫升/升。