[發明專利]一種淫羊藿苷化學對照品的分離制備方法

有效

• 申請號: 200810229886.1
• 申請日: 2008-12-17
• 公開（公告）號: CN101747391A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: 肖紅斌;王莉;高明哲
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C07H17/07
• 分類號: C07H17/07;C07H1/06
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳;周秀梅

技術領域

本發明涉及一種從淫羊藿提取物中分離獲得純度大于98％的淫羊藿苷 化學對照品的制備方法，主要包括初步柱分離或醇沉除雜脫色以及快速的 高效液相制備方法規模化制備。

背景技術

淫羊藿(Herba?Epimedii)是我國使用最為悠久的中藥之一，具有補腎 陽、強筋骨、祛風濕的功效。現代研究表明，淫羊藿具有抗骨質疏松、增 強性功能、增加心腦血管血流量、促進造血功能、增強免疫、抗衰老、抗 炎、抗腫瘤等多方面藥理作用。淫羊藿苷是淫羊藿的主要活性成分，也是 我國2005版國家藥典中淫羊藿藥材的含量測定成分，并規定其在藥材中的 含量應達0.5％以上。淫羊藿苷的結構式如下：

淫羊藿苷的分離制備方法主要有：胡云峰等(中國專利 CN200510061251.1，2007年公開)采用浸提、脫雜、萃取、樹脂吸附、干 燥五大工序獲取不同含量的淫羊藿苷(5％-50％)；田景振等(山東中醫藥大 學學報.2004，28(6)：456-458)用大孔吸附樹脂法可獲得60.30％含量的淫 羊藿苷；梁冉等(西北農業學報2005，14(2)：141~14)采用30％乙醇超聲 波輔助提取、聚酰胺柱及乙酸乙酯萃取的工藝可獲得60％含量的淫羊藿苷， 進一步重結晶可獲得90.94％含量的淫羊藿苷。文獻(Liu?Renmin，et?al. Journal?of?Chromatography?A，1064，2005，53-57)還報道了高速逆流 色譜法制備98％含量的淫羊藿苷，但僅僅是實驗室規模且使用特殊的設備和 昂貴有毒的流動相。目前，高效液相制備色譜用于大規模(克級以上)制 備98％含量的淫羊藿苷的工作還未見報道。

發明內容

本發明在整合各種淫羊藿苷制備方法基礎上，通過樣品預處理研究、 高效液相色譜填料的選擇、快速色譜條件的開發、進樣體積及濃度的優化， 以及檢測波長的選擇等多方面研究，發明了一種低成本、快速的高效液相 制備色譜方法，制備規模可達20g/月并且保證純度(＞98％)及產品色澤。 本發明的目的是開發出一種可以獲得十克級規模并且純度在98％以上的淫 羊藿苷化學對照品的制備新方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案：

一種淫羊藿苷化學對照品的分離制備方法，以質量含量≥20％，優選 50％以上淫羊藿苷提取物為原料，經初步柱分離或醇沉除雜脫色，以制備型 高效液相色譜為分離手段，以一定比例的含乙腈水溶液為洗脫體系，獲得 月產20g規模且純度大于98％的淫羊藿苷化學對照品；具體步驟為：

1)初步柱分離或醇沉除雜脫色：

柱分離除雜脫色：淫羊藿苷提取物用水或體積濃度40-80％乙醇水溶液 溶解，上樹脂柱或聚酰胺柱分離，以乙醇-水溶液梯度洗脫，其中乙醇的體 積濃度從0％-70％變化，收集體積濃度50-70％乙醇洗脫物，濃縮干燥得黃 色粉末；

或醇沉除雜脫色：將淫羊藿苷提取物用40-80％乙醇水溶液溶解，離心 得沉淀物、或靜置≥4小時過濾沉淀物，沉淀物烘干后可得黃色粉末；

2)高效液相制備：

黃色粉末用體積濃度40-80％的乙醇水溶液溶解，配置成濃度為50～ 150mg/ml的供試品溶液，經0.45μm微孔濾膜過濾；采用柱長為10-50cm、 直徑為1-10cm的高效液相制備色譜柱進行分離，六通閥或泵進樣，進樣體 積為1-50ml，以體積濃度為15-55％的乙腈水溶液為洗脫體系，流速控制在 10-400ml/min，在線紫外檢測，收集純度大于98％的淫羊藿苷流份；

3)淫羊藿苷化學對照品的獲得：

上述流份直接濃縮至干、或用甲醇或乙醇重結晶即可得到純度大于98％ 的黃白色淫羊藿苷對照品。

上述方法中，初步柱分離用樹脂以非極性大孔吸附樹脂較好。高效液相 制備過程采用的流動相中乙腈的體積濃度為20-30％；高效液相制備柱的填 料為C6、C8或C18鍵合相填料，其粒徑為5～20μm，紫外檢測波長優選 270nm、318nm或349nm，具體檢測波長根據樣品中淫羊藿苷信號的超載情 況而定。

以本發明從淫羊藿提取物中分離淫羊藿苷化學對照品具有如下優點和 進步：

1.本發明以制備型高效液相為分離手段，使淫羊藿苷得到高效分離， 可以獲得純度在98％以上的淫羊藿苷化學對照品。