[發(fā)明專利]一種新的抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810229486.0
• 申請(qǐng)日: 2008-12-10
• 公開（公告）號(hào): CN101418039A
• 公開（公告）日: 2009-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尚德靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遼寧師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/08
• 分類號(hào): C07K7/08;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/19;A61K38/10;A61P31/00;A61P35/00;C12R1/19
• 代理公司: 大連智慧專利事務(wù)所
• 代理人: 周志艦

1.一種中國(guó)林蛙基因編碼的抗菌肽temporin-1CEa，其特征在于：多肽的全序列 為Phe?Val?Asp?Leu?Lys?Lys?Ile?Ala?Asn?Ile?Ile?Asn?Ser?Ile?Phe-NH₂，分子 量1733道爾頓。

2.編碼中國(guó)林蛙抗菌肽temporin-1CEa的基因，其特征在于：cDNA的序列全長(zhǎng) 315bp，其自5’端至3’端的序列由序列表SEQ?ID?NO：1所示序列組成。

3.如權(quán)利要求2所述的中國(guó)林蛙抗菌肽temporin-1CEa基因核苷酸序列，其特 征在于：編碼中國(guó)林蛙成熟抗菌肽為第142-192位核苷酸，其核苷酸序列為 TTTGTAGATTTGAAAAAGATTGCAAATATTATCAATTCTATATTTGGAAAA。

4.一種權(quán)利要求1所述的抗菌肽temporin-1CEa的基因工程制備方法如下：

(1)人工合成T6AMP基因：將編碼權(quán)利要求1所述的抗菌肽的基因中的 第142-192位核苷酸進(jìn)行人工合成，在序列5’端加1個(gè)甲硫氨酸密碼子ATG， 串聯(lián)連接6段后，在3’端加終止密碼子TAA，最后在5’和3′端分別加入兩個(gè)酶 切位點(diǎn)：SmaI/HindIII，并將該339bp的DNA片段拼接成雙鏈DNA，即為T6AMP 基因；

(2)基因工程菌的制備：利用SmaI/Hind?III將T6AMP基因片段亞克隆至 pET42a-PshAI/Hind?III表達(dá)載體中，并轉(zhuǎn)化至E.coli?BL21(DE3)中，得到高效表 達(dá)的中國(guó)林蛙抗菌肽temporin-1CEa的基因工程菌；

(3)目的蛋白純化：用GST-tag親和層析柱純化重組蛋白，得到 temporin-1CEa抗菌肽。

5.權(quán)利要求1所述的抗菌肽temporin-1CEa在制備抗革蘭氏陽性菌及抗乳腺癌 和宮頸癌藥物中的應(yīng)用。