[發(fā)明專利]一種菌株熱應激修飾方法和裝置有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200810227474.4 | 申請日： | 2008-11-26 |
| 公開（公告）號： | CN101735965A | 公開（公告）日： | 2010-06-16 |
| 發(fā)明（設計）人： | 隋欣;陳歷俊 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京三元食品股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12M1/00;C12R1/245;C12R1/225 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飛 |
| 地址： | 100085 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 菌株 應激 修飾 方法 裝置 | ||
技術(shù)領域
本發(fā)明涉及微生物定向改造技術(shù)。具體的說，涉及一種菌株熱應 激修飾方法和裝置。
背景技術(shù)
乳酸菌株的修飾是采用各種物理、化學或基因修飾等方法對菌株 的某些功能特性進行定向改造，應用于干酪制造中的菌株修飾技術(shù)主 要目的是抑制乳酸菌的產(chǎn)酸性，同時盡可能多的保留酶活性，使之能 在干酪成熟期間加速生化降解，從而促進干酪成熟的方法。修飾發(fā)酵 劑的方法主要有熱休克、冷休克、冷凍或噴霧干燥、溶菌酶處理、溶 劑處理和基因修飾等。
菌株熱應激修飾方法是采用熱處理對乳酸菌株進行定向改造的 一種物理方法。篩選后的乳酸菌株經(jīng)熱應激修飾后(稱作attenuated starter)，菌株的產(chǎn)酸性能受到一定程度的抑制，同時盡可能多的保留 酶活力，與干酪加工所用發(fā)酵劑一起加入到干酪原料奶中，熱應激修 飾菌株不影響干酪的制作工藝和最終產(chǎn)品的理化指標，但能夠加速干 酪蛋白、脂肪的水解，從而縮短干酪成熟時間。與其它修飾方法相比， 此方法采用物理熱激方法處理可食用性乳酸菌，具有安全性；同時在 干酪中使用時操作簡便，不需要增添額外的設備，可實現(xiàn)批量連續(xù)式 處理，是一種實用性很強的促干酪成熟的方法。
目前采用熱應激的方法主要通過兩種方式進行：一是置換法，將 篩選后的菌株在預先加熱的一部分基液中保溫一定時間實現(xiàn)熱激，再 加入另一部分基液使熱激過程結(jié)束，即通過熱、冷基液的置換完成熱 激處理(Frey.J.P.，et?al，1986.Heat-and?freeze-shocking?cause?changes?in peptidase?and?protease?activity?of?Lactobacillus?helVeticus. Milchwissenschaft，41(11)：681-685)。這種方法在實際操作時，菌液需 用至少10倍于其體積(或重量)的基液進行相交換，所用基液量大、 操作不方便，而且在大批量處理時，往往會出現(xiàn)熱處理溫度不準確的 情況，使熱應激效果具有極大的不穩(wěn)定性。
二是通過特殊熱交換器進行，將篩選后的菌株直接通過特定熱交 換設備而完成熱激處理(Asensio.C.，et?al，1995，Effect?of?heat?treatment on?the?proteolytic?activity?of?mesophilic?bacteria?isolated?from?goat’s milk?cheese，21：25-30)。這種方法不必使用大量的基液進行熱處理， 操作方便、效果穩(wěn)定，但由于必須使用特定的設備，分批處理菌液， 其設備和生產(chǎn)成本較高，限制了實際應用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種操作簡便、效果穩(wěn)定、可連續(xù)批量進行 熱應激菌株處理的熱應激修飾方法。
本發(fā)明還提供一種進行菌株熱應激處理的組合裝置。
本發(fā)明采用組合設備的熱應激修飾方法，包括：
1)菌株的活化；
2)菌株高密度培養(yǎng)；
3)菌株熱激處理：熱處理溫度：50～80℃，熱處理時間：5秒～100 秒。
在進行熱應激修飾前，乳酸菌株一般需要進行活化和高密度培 養(yǎng)，使菌體密度達到108～1010cfu/ml。具體的說，以篩選后的菌株為原 始菌株，經(jīng)活化培養(yǎng)后恢復菌株活力；經(jīng)優(yōu)化試驗確定菌體增殖培養(yǎng) 條件，然后采用化學中和法對菌體進行高密度培養(yǎng)，以獲得高密度的 菌株懸液；之后采用加料泵、加熱設備、冷卻設備和不銹鋼盤管進行 熱應激處理。
先選擇菌株，菌株的活化條件如下：
菌株：原始菌株凍干菌粉
活化培養(yǎng)基：8％～15％的脫脂奶培養(yǎng)基
活化培養(yǎng)溫度：25～45℃
活化培養(yǎng)時間：2小時～72小時
菌株經(jīng)活化，活力恢復后進行高密度培養(yǎng)，培養(yǎng)條件如下：
脫脂奶培養(yǎng)基的配方：8％～15％脫脂奶，酵母提取物0.1％～3.0％， 蛋白胨0.1％～3.0％，CaCO3?0.1％～3.0％，乳糖0.1％～3.0％，K2HPO40.05％～5.00％。
培養(yǎng)設備：全自動培養(yǎng)生化反應器
培養(yǎng)溫度：25～45℃
培養(yǎng)時間：8小時～72小時
轉(zhuǎn)速：100～600rpm
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