[發明專利]一種構建腦心肌炎病毒感染性克隆的方法無效
| 申請號： | 200810225311.2 | 申請日： | 2008-10-29 |
| 公開（公告）號： | CN101386860A | 公開（公告）日： | 2009-03-18 |
| 發明（設計）人： | 楊漢春;蓋新娜;郭鑫;張國慶;朱書 | 申請（專利權）人： | 中國農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/41 | 分類號： | C12N15/41;C12N15/63 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 | 代理人： | 王朋飛 |
| 地址： | 100083*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 構建 腦心肌炎病毒 感染性 克隆 方法 | ||
1.一種構建腦心肌炎病毒的感染性克隆的方法，其包括步驟：
(1)改造低拷貝質粒載體，使其只含有構建感染性克隆所需的 酶切位點；
(2)提取腦心肌炎病毒的總RNA；
(3)用RT-PCR方法分三個片段擴增腦心肌炎病毒的全長cDNA， 獲得的三個片段的cDNA兩端分別含有不同的酶切位點；用RT-PCR方 法分三個片段擴增腦心肌炎病毒的全長cDNA時，在腦心肌炎病毒的 5′端非翻譯區前加入T7RNA聚合酶啟動子核心序列；
(4)將三個片段的cDNA分別建立亞克隆；
(5)用雙酶切的方法將三個片段的cDNA依次定向克隆至改造的 低拷貝質粒載體中，得到含有腦心肌炎病毒全長cDNA的腦心肌炎病 毒感染性克隆。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，用RT-PCR方法分 三個片段擴增腦心肌炎病毒的全長cDNA時，通過定點突變形成新的 酶切位點，作為感染性克隆的遺傳標記。
3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的腦心肌 炎病毒為豬腦心肌炎病毒BJC3。
4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的低拷貝 質粒載體為pWSK29質粒載體。
5.根據權利要求1-4任一項所述的方法構建的腦心肌炎病毒感 染性克隆。
6.如權利要求5所述的腦心肌炎病毒感染性克隆，其特征在于， 所述的腦心肌炎病毒為豬腦心肌炎病毒BJC3。
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