[發(fā)明專利]分子設(shè)計的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白β亞基類熒光蛋白及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810219673.0
• 申請日: 2008-12-04
• 公開（公告）號: CN101759795A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 夏坤;佟順剛
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州天寶頌原生物科技開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/405
• 分類號: C07K14/405;C07K19/00;C12N15/31;C12N15/62;C12N15/63;G01N33/52;G01N33/543
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務(wù)所有限公司 44228
• 代理人: 劉媖

1.一種結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：藻藍(lán)膽素PCB通過硫醚鍵結(jié)合在重組藻紅藍(lán)蛋白beta亞基201位，相當(dāng)于原始藻紅藍(lán)蛋白beta亞基的153位。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：所述的蛋白質(zhì)的序列為序列1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：所述的蛋白質(zhì)序列N端具有His-tag標(biāo)記，但是His-tag標(biāo)記不限于N端。

4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：所述的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB是指藻藍(lán)膽素PCB通過硫醚鍵結(jié)合在201位，相當(dāng)于原始藻紅藍(lán)蛋白beta亞基的153位。

5.一種結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白突變體，其特征在于：將藻紅藍(lán)蛋白beta亞基編碼基因克隆于表達(dá)質(zhì)粒，利用基因工程方法將其突變，表達(dá)得到藻紅藍(lán)蛋白beta亞基突變體，對除結(jié)合色素的201外的所有位點進(jìn)行突變一般不會對蛋白性質(zhì)有較大的影響，屬于同類蛋白，對此蛋白進(jìn)行部分缺失，對蛋白性質(zhì)無較大影響，也屬于同類蛋白。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白突變體，其特征在于：將藻紅藍(lán)蛋白beta亞基編碼基因克隆于表達(dá)質(zhì)粒，利用基因工程方法把其第130位(相當(dāng)于原始藻紅藍(lán)蛋白beta亞基第82位)半胱氨酸殘基突變?yōu)榻z氨酸殘基，可表達(dá)得到藻紅藍(lán)蛋白beta亞基突變體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白的突變體，其特征在于：所述的突變體的序列為序列2。

8.根據(jù)權(quán)利要求5、6或7所述的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白突變體，其特征在于：所述的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB是指藻藍(lán)膽素PCB通過硫醚鍵結(jié)合在201位，相當(dāng)于原始藻紅藍(lán)蛋白beta亞基的153位。

9.一種鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：將鏈霉親和素編碼基因和藻紅藍(lán)蛋白beta亞基編碼基因拼接后克隆于表達(dá)質(zhì)粒，表達(dá)得到鏈霉親和素和藻紅藍(lán)蛋白beta亞基的融合蛋白。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：所述的蛋白質(zhì)的序列為序列3。

11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：鏈霉親和素在PecB的N端，但是不限于在N端。

12.根據(jù)權(quán)利要求9、10、11所述的鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：所述的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB是指藻藍(lán)膽素PCB通過硫醚鍵結(jié)合在329位，相當(dāng)于原始藻紅藍(lán)蛋白beta亞基的153位。

13.一種鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白突變體，其特征在于：將鏈霉親和素編碼基因和藻紅藍(lán)蛋白beta亞基編碼基因拼接后克隆于表達(dá)質(zhì)粒，利用基因工程方法把其第258位(相當(dāng)于原始藻紅藍(lán)蛋白beta亞基第82位)半胱氨酸殘基突變?yōu)榻z氨酸殘基，表達(dá)得到鏈霉親和素和藻紅藍(lán)蛋白beta亞基的融合蛋白的突變體。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白突變體，其特征在于：所述的蛋白質(zhì)的序列為序列4。

15.根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白突變體，其特征在于：所述的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB是指藻藍(lán)膽素PCB通過硫醚鍵結(jié)合在329位，相當(dāng)于原始藻紅藍(lán)蛋白beta亞基的153位。

16.結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白的應(yīng)用，其特征在于：利用鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白檢測可溶性抗原或抗體的免疫檢測。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的結(jié)合藻藍(lán)膽素PCB的藻紅藍(lán)蛋白beta亞基類熒光蛋白的應(yīng)用，其特征在于：所述的免疫檢測方法包括以下步驟：

(1)將可與固相結(jié)合并能識別抗原的第一抗體包被固相上，封閉液封閉未結(jié)合抗體部分，備用；

(2)將待測抗原、識別抗原的第二抗體、識別第二抗體的標(biāo)記生物素的抗抗體、標(biāo)記鏈霉素親和素的熒光藻膽蛋白按一定步驟加入固相中，充分反應(yīng)；

(3)利用微孔板熒光檢測儀或其它相應(yīng)的儀器檢測熒光，分析結(jié)果。