[發明專利]分子設計的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白β亞基類熒光蛋白及其應用

無效

• 申請號: 200810219672.6
• 申請日: 2008-12-04
• 公開（公告）號: CN101759794A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發明（設計）人: 夏坤;佟順剛
• 申請（專利權）人: 廣州天寶頌原生物科技開發有限公司
• 主分類號: C07K14/405
• 分類號: C07K14/405;C07K19/00;C12N15/31;C12N15/62;C12N15/63;G01N33/52;G01N33/543
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228
• 代理人: 劉媖

1.一種結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：藻紅膽素PEB通過硫醚鍵結合在重組藻紅藍蛋白beta亞基的201位，相當于原始藻紅藍蛋白beta亞基的153位。

2.根據權利要求1所述的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：所述的蛋白質的序列為序列1。

3.根據權利要求1或2所述的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：所述的蛋白質序列N端具有His-tag標記，但是His-tag標記不限于N端。

4.根據權利要求1、2或3所述的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：所述的結合藻紅膽素PEB是指藻紅膽素PEB通過硫醚鍵結合在201位，相當于原始藻紅藍蛋白beta亞基的153位。

5.一種結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白突變體，其特征在于：將藻紅藍蛋白beta亞基編碼基因克隆于表達質粒，利用基因工程方法將其突變，可表達得到藻紅藍蛋白beta亞基突變體，對除結合色素的201外的所有位點進行突變一般不會對蛋白性質有較大的影響，屬于同類蛋白，對此蛋白進行部分缺失，對蛋白性質無較大影響，也屬于同類蛋白。

6.根據權利要求1所述的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：將藻紅藍蛋白beta亞基編碼基因克隆于表達質粒，利用基因工程方法把其第130位(相當于原始藻紅藍蛋白beta亞基第82位)半胱氨酸殘基突變為丙氨酸殘基，可表達得到藻紅藍蛋白beta亞基突變體。

7.根據權利要求6所述的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白的突變體，其特征在于：所述的突變體的序列為序列2。

8.根據權利要求5、6或7所述的結合藻紅膽素PEB的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白突變體，其特征在于：所述的結合藻紅膽素PEB是指藻紅膽素PEB通過硫醚鍵結合在201位，相當于原始藻紅藍蛋白beta亞基的153位。

9.一種鏈霉親和素標記的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：將鏈霉親和素編碼基因和藻紅藍蛋白beta亞基編碼基因拼接后克隆于表達質粒，表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白beta亞基的融合蛋白。

10.根據權利要求9所述的鏈霉親和素標記的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：所述的蛋白質的序列為序列3。

11.根據權利要求9所述的一種鏈霉親和素標記的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：鏈霉親和素在PecB的N端，但是不限于在N端。

12.根據權利要求9、10或11所述的鏈霉親和素標記的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白，其特征在于：所述的結合藻紅膽素PEB是指藻紅膽素PEB通過硫醚鍵結合在329位，相當于原始藻紅藍蛋白beta亞基的153位。

13.一種鏈霉親和素標記的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白突變體，其特征在于：將鏈霉親和素編碼基因和藻紅藍蛋白beta亞基編碼基因拼接后克隆于表達質粒，利用基因工程方法把其第258位(相當于原始藻紅藍蛋白beta亞基第82位)半胱氨酸殘基突變為丙氨酸殘基，表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白beta亞基的融合蛋白的突變體。

14.根據權利要求13所述的鏈霉親和素標記的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白突變體，其特征在于：所述的蛋白質的序列為序列4。

15.根據權利要求13或14所述的鏈霉親和素標記的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白突變體，其特征在于：所述的結合藻紅膽素PEB是指藻紅膽素PEB通過硫醚鍵結合在329位，相當于原始藻紅藍蛋白beta亞基的153位。

16.結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白的應用，其特征在于：利用鏈霉親和素標記的結合藻紅膽素PEB的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白檢測可溶性抗原或抗體的免疫檢測。

17.根據權利要求16所述的結合藻紅膽素的藻紅藍蛋白beta亞基類熒光蛋白的應用，其特征在于：所述的免疫檢測包括以下步驟：

(1)將可與固相結合并能識別抗原的第一抗體包被固相上，封閉液封閉未結合抗體部分，備用；

(2)將待測抗原、識別抗原的第二抗體、識別第二抗體的標記生物素的抗抗體、標記鏈霉素親和素的熒光藻膽蛋白按一定步驟加入固相中，充分反應；

(3)利用微孔板熒光檢測儀或其它相應的儀器檢測熒光，分析結果。