[發明專利]一種高效的ELP融合蛋白酶及其制備和應用

無效

• 申請號: 200810219603.5
• 申請日: 2008-12-02
• 公開（公告）號: CN101418290A
• 公開（公告）日: 2009-04-29
• 發明（設計）人: 徐安龍;藍東明;黃光瑞;王磊;陳尚武
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50;C12N15/62;C12N15/70;C12P21/06
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司
• 代理人: 華 輝

1、由彈性蛋白樣多肽(ELP)基因和人鼻病毒3C蛋白酶基因融合編碼的ELP-3C蛋白酶，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

2、權利要求1所述的ELP-3C蛋白酶的制備方法，包括以下步驟：

(1)將ELP-3C蛋白酶編碼基因克隆到原核表達載體pET23a上，構建表達質粒；

(2)將所述表達質粒轉化入大腸桿菌株BL21(DE3)，并進行培養表達；

(3)對所述大腸桿菌進行超聲裂解，裂解菌液進行低溫離心，取上清液：

(4)通過提高所述上清液的鹽離子濃度觸發ELP-3C蛋白酶凝集，室溫離心，除去上清液，沉淀物用低溫低鹽溶液重新溶解；

(5)重復所述凝集、離心和重新溶解的步驟直至獲得純的ELP-3C蛋白酶。

3、根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)所述培養表達是將單菌落接種于Amp+的LB液體加富培養基中，37℃?225rpm培養12小時，作為種子菌；取種子菌接種于新鮮的Amp+TB培養基中，37℃劇烈振蕩放大培養至O.D.600為1.0時，將溫度調到18℃培養24小時。

4、權利要求1所述的ELP-3C蛋白酶在切割融合蛋白中的應用。

5、根據權利要求4所述的應用，其特征在于：ELP-3C蛋白酶在切割融合蛋白后，通過提高溶液鹽離子濃度觸發ELP-3C蛋白酶凝集并通過離心將其除去。

6、根據權利要求4或5所述的應用，其特征在于：ELP-3C蛋白酶連續進行若干次酶切。