[發(fā)明專利]一種高效的ELP融合蛋白酶及其制備和應(yīng)用無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200810219603.5 | 申請(qǐng)日： | 2008-12-02 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN101418290A | 公開(kāi)（公告）日： | 2009-04-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 徐安龍;藍(lán)東明;黃光瑞;王磊;陳尚武 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中山大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N9/50 | 分類號(hào)： | C12N9/50;C12N15/62;C12N15/70;C12P21/06 |
| 代理公司： | 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 | 代理人： | 華 輝 |
| 地址： | 510275廣*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高效 elp 融合 蛋白酶 及其 制備 應(yīng)用 | ||
1、由彈性蛋白樣多肽(ELP)基因和人鼻病毒3C蛋白酶基因融合編碼的ELP-3C蛋白酶，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。
2、權(quán)利要求1所述的ELP-3C蛋白酶的制備方法，包括以下步驟：
(1)將ELP-3C蛋白酶編碼基因克隆到原核表達(dá)載體pET23a上，構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒；
(2)將所述表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌株BL21(DE3)，并進(jìn)行培養(yǎng)表達(dá)；
(3)對(duì)所述大腸桿菌進(jìn)行超聲裂解，裂解菌液進(jìn)行低溫離心，取上清液：
(4)通過(guò)提高所述上清液的鹽離子濃度觸發(fā)ELP-3C蛋白酶凝集，室溫離心，除去上清液，沉淀物用低溫低鹽溶液重新溶解；
(5)重復(fù)所述凝集、離心和重新溶解的步驟直至獲得純的ELP-3C蛋白酶。
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)所述培養(yǎng)表達(dá)是將單菌落接種于Amp+的LB液體加富培養(yǎng)基中，37℃?225rpm培養(yǎng)12小時(shí)，作為種子菌；取種子菌接種于新鮮的Amp+TB培養(yǎng)基中，37℃劇烈振蕩放大培養(yǎng)至O.D.600為1.0時(shí)，將溫度調(diào)到18℃培養(yǎng)24小時(shí)。
4、權(quán)利要求1所述的ELP-3C蛋白酶在切割融合蛋白中的應(yīng)用。
5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：ELP-3C蛋白酶在切割融合蛋白后，通過(guò)提高溶液鹽離子濃度觸發(fā)ELP-3C蛋白酶凝集并通過(guò)離心將其除去。
6、根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的應(yīng)用，其特征在于：ELP-3C蛋白酶連續(xù)進(jìn)行若干次酶切。
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