[發明專利]雌激素相關受體2在維持小鼠胚胎干細胞多能性中的應用

無效

• 申請號: 200810219195.3
• 申請日: 2008-11-18
• 公開（公告）號: CN101492677A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發明（設計）人: 裴端卿;張小飛;張娟;王濤
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N5/10;C12Q1/68;G01N33/53
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技術領域：

本發明涉及Esrrb(雌激素相關受體2)的構建表達載體以及在胚胎干細胞中的用途，所述Esrrb是一個雌激素相關受體家族受體，在胚胎發育過程中起重要作用的轉錄因子。

背景技術：

胚胎干細胞(Embryonic?stem?cells，ES細胞)，是一類來源于哺乳動物胚胎發育早期的胚泡(Blastocyst)期的內細胞團(ICM-Inner?cell?mass)的多能性細胞，重要特性之一就是它仍然具有隨著發育成三個完整的胚層的能力，這也是胚胎干細胞能應用于臨床的基礎。因此，基于干細胞這種全能性或者多能性特性的療法是現在許多未解決的疾病(例如帕金森氏病)的一種有前景的解決方案。但是，在將人的ES細胞安全和有效地應用到治療人類疾病之前，我們必須克服人ES帶來的很多難以克服的障礙。目前，ES細胞的基礎生物學研究已經提供了一些針對這些障礙的相對比較合理的解決方式，例如將維持在多能性狀態下的ES細胞可以在特定的培養條件下誘導分化成特定的其他細胞類型。

干細胞的多能性以及自我更新能力的維持，需要多條信號通路以及各種轉錄因子來協調。其中，維持小鼠ES細胞的多能性的轉錄因子包括Oct4、Sox2、FoxD3和Nanog(Pan，G.，等人，(2006)Faseb?J20(10)，1730-1732；Boyer，L.A.，等人，(2005)Cell?122(6)，947-956；Mitsui，K.，(2003)Cell?113(5)，631-642；Chambers，I.，(2003)Cell?113(5)，643-655)。近期，大規模的生物學工具(如微陣列核蛋白組，RNA干擾等)對于干細胞的分析，生成了大量關于干細胞多能性調節因子的數據(Boyer，L.A.，等人，(2005)Cell?122(6)，947-956；Assou，S.等人(2007)Stem?Cells?25(4)，961-973；Orkin，S.H.(2005)Cell?122(6)，828-830；Wang?J.等人(2006)Nature?444(7117)，364-368；Ivanova，N，等人，(2006)Nature?442(7102)，533-538)，但是關于干細胞維持多能性及自我更新的分子機制還不是很清楚?，F有技術中已經證明了在干細胞培養基中添加LIF(白細胞介素生長因子)來維持干細胞的多能性。

作為雌激素相關受體家族的一員，Esrrb的缺失會引起干細胞的分化和胚胎的不正常發育(MitsunagaK等人，(2004)Mech?Dev?121(3)，237-246)。RNAi實驗發現，和干擾了Nanog的表達一樣，干擾了Esrrb表達的干細胞在LIF存在的情況下也會分化，并且這種分化可以被過表達的Nanog所部分挽回(Ivanova，N，等人，(2006)Nature?442(7102)，533-538)。在蛋白水平上，通過Nanog富集的干細胞裂解液中的復合體中也包括Esrrb，這些結果都表明了Esrrb在維持胚胎干細胞中所起的重要作用(Wang?J.等人(2006)Nature444(7117)，364-368)。并且這些結果可能說明Esrrb可能是獨立于Nanog而存在的另外一條可以維持胚胎干細胞多能性的信號通路。在此我們證明了Esrrb在沒有LIF的情況下仍然能維持胚胎干細胞的多能性和自我更新。這可以為干細胞的培養提供一條新的途徑，而且由于替換掉了昂貴的LIF，使得干細胞的培養更加經濟。

發明內容：

在本發明中，發明人將小鼠Esrrb基因(序列見SEQ?ID?NO：1)的CDS構建到pPYCAGIP載體中，以便驗證Esrrb在小鼠胚胎干細胞中的作用。

令人驚訝的，發明人發現，當小鼠Esrrb在胚胎干細胞系CGR8及E14T中，建立穩定轉染的細胞株，與空載體pPYCAGIP形成的穩定轉染細胞株相比，可以不依賴于LIF(白細胞介素抑制因子)而維持胚胎干細胞的多能性和自我更新。使用我們所構建的Esrrb及其穩定轉染的干細胞表達株，可以豐富干細胞研究的研究手段和材料，將更好的研究胚胎干細胞多能性和自我更新維持的分子機制及其豐富整個調控網絡。

附圖說明：

圖1：顯示了將pPyCAGIP-Esrrb及其pPyCAGIP載體轉入胚胎干細胞CGR8后，篩選出的穩定轉染表達株，在LIF存在(LIF+)或者不存在(LIF-)的情況下的細胞形態。