[發明專利]一種用色譜柱純化氯法拉濱的方法

有效

• 申請號: 200810217434.1
• 申請日: 2008-11-18
• 公開（公告）號: CN101475621A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發明（設計）人: 蘇軍;張廣明;王慶秋
• 申請（專利權）人: 深圳萬樂藥業有限公司
• 主分類號: C07H19/173
• 分類號: C07H19/173;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及的是氯法拉濱的純化方法，具體地說是一種用色譜柱純化氯法拉濱的方法。?

背景技術

氯法拉濱(Clofarabine)是一種核苷嘌呤類抗癌藥，對多種實體瘤均有作用，對急性白血病的治療尤為有效，為FDA批準的首個專用于兒童白血病的藥物。其結構式如下所示：?

美國專利申請WO03011877中公布了氯法拉濱的合成方法，即從1，3，5-三-O-苯甲酰基-α-D-呋喃核糖開始，經重排、氟代、溴化后得到1-溴-2-脫氧-2-氟-3，5-二-O-苯甲酰基-α-D-呋喃核糖，再與2-氯腺嘌呤縮合后脫保護合成而得。其中縮合及脫保護反應式如下所示。?

上述縮合反應的產物為β構型的產物III和III的α構型異構體的混合物，該混合物脫保護后的產物包括氯法拉濱和其α構型異構體。由于氯法拉濱和其α構型異構體兩種物質的理化性質極其接近，常規的純化方法如重結晶很難將α構型異構體從氯法拉濱中除去。?

上述專利公開了通過合成工藝條件控制能將α構型異構體的含量控制在5％左右。但中國專利申請CN101153049中描述，按照WO03011877公開的技術方案操作，α構型異構體的含量實際大于10％，并公開了通過控制反應條件使α構型異構體的含量減小至2％左右的技術方案。作為一種人用藥物，氯法拉濱需要一種純化方法來達到更高純度。?

發明內容

本發明解決的技術問題是提供一種用色譜柱純化氯法拉濱的方法，該方法使氯法拉濱的含量達到99.8％以上，收率達到90％以上。

本發明的技術方案包含以下步驟：?

(1)采用反相大孔吸附樹脂為色譜柱填料制備色譜柱；?

(2)將濃度為0.001～0.025wt％的氯法拉濱粗品水溶液加入上述色譜柱；?

(3)先用純水對步驟(2)中的色譜柱進行洗脫，然后依次用體積比逐漸減小的純水/有機溶劑混合液作為洗脫液進行梯度洗脫，所述有機溶劑為甲醇、乙醇或丙酮其中一種。?

本發明的技術方案中，所述步驟(1)中色譜柱填料為反相大孔吸附樹脂，優選的填料型號為MCI-gel?CHP20P和MCI-gel?CHP20SS。MCI-gel?CHP20P(粒徑75-150μm)和MCI-gel?CHP20SS(粒徑63-150μm)為市售日本三菱公司生產的聚苯乙烯型反相大孔吸附樹脂填料，廣泛應用于植物提取物分離，脫色素等領域。本發明將他們應用于小分子化學藥的純化分離，特別是氯法拉濱的純化。最優選的反相大孔樹脂填料型號為MCI-gel?CHP20P。?

將反相大孔吸附樹脂填料在裝柱前在乙醇中浸泡10小時以上，攪拌均勻裝入色譜柱，并用純水洗至流出液無乙醇，流速為6ml/min左右。選用的色譜柱為柱長：直徑比為10～20：1的玻璃色譜柱。氯法拉濱水溶性較差，需要大量水溶解，從節約溶劑和時間考慮，優選濃度為0.025wt％的氯法拉濱粗品水溶液上樣。上樣時小心緩慢將氯法拉濱粗品水溶液沿色譜柱壁倒入，保持色譜柱上表面為水平。上完樣后進行梯度洗脫，先用純水洗脫，然后用純水/有機溶劑體積比依次為20：1，20：2，20：3，20：4的洗脫液進行洗脫，有機溶劑優選乙醇。梯度洗脫時流速為2～6ml/min，優選6ml/min。隨著洗脫液中甲醇、乙醇或丙酮所占比例的增多，洗脫液的極性降低，根據反相色譜的特點，極性較大的氯法拉濱的α構型異構體先流出色譜柱，極性較小的氯法拉濱在色?譜柱中停留的時間加長。?

以HPLC監測洗脫液中氯法拉濱含量，HPLC條件如下：色譜柱SupelDiscovery?C18(250×4.6mm，5μm)，流動相為以氫氧化鈉調pH到5.5的0.05M磷酸二氫鉀溶液-乙腈(85：15，V/V)，進樣量10μL，檢測波長211nm，柱溫：20℃，流速：1.0ml/min。收集以面積歸一化法計算氯法拉濱含量大于99.8％，單一雜質含量小于0.1％的洗脫液，合并后在旋轉蒸發儀上減壓濃縮至干，得到氯法拉濱白色固體，濃縮過程中控制壓力大小防止暴沸和沖料。?

本發明的方法以反相大孔吸附樹脂作為色譜柱填料，并以適合的梯度洗脫條件，使氯法拉濱產品純度達到99.8％以上，收率達到90％以上。操作簡單，無毒無污染，無需特殊設備，溶劑可回收，適合工業化生產。?

下面結合具體實施方式的實施例對本發明作進一步詳細說明。?

具體實施方式

制備實施例??氯法拉濱粗品的合成?