[發明專利]一種人促紅細胞生長素脂質體

無效

• 申請號: 200810216460.2
• 申請日: 2008-09-27
• 公開（公告）號: CN101683521A
• 公開（公告）日: 2010-03-31
• 發明（設計）人: 張水華;潘韻;柴向東;蔣為民;邱小玲;易艷蓉
• 申請（專利權）人: 深圳市海王英特龍生物技術股份有限公司
• 主分類號: A61K38/19
• 分類號: A61K38/19;A61K9/127;A61K38/20;A61K38/21;A61K38/30;A61K47/24;A61P7/06;A61P13/12
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司
• 代理人: 黃韌敏

技術領域

本發明涉及一種生物藥物脂質體，尤其涉及一種人促紅細胞生長素(EPO)的脂質體。

背景技術

EPO已廣泛應用于臨床上各種貧血的治療。其中最有效的是腎衰、尿毒癥所伴隨貧血的治療，其他對腫瘤相關性貧血，人類免疫缺陷病毒(HIV)相關貧血，骨髓移植后貧血，早產兒和孕產婦貧血，為手術期減少異源性輸血等方面也有良好的療效。

當前使用的rHuEPO都是單體EPO，EPO在人體內的半衰期比較短，一般來說EPO靜脈注射后在3-4天后在血液中就很難檢測出活性，所以臨床上，常采用皮下注射或者靜脈注射、每周注射頻率為2-3次，用藥頻繁；而慢性貧血病人常需要大劑量長期應用，因此常規的EPO用藥頻率和用藥量較大，給病人帶了諸多不便和經濟壓力。另外長期大量使用EPO會產生一些副作用，如血管反應性下降，血壓升高，血粘度增加，血栓形成等；情況嚴重的還會造成腦部供血不足，甚至引發腦缺血。Dillard等(Dillard?DG，2001)還發現給前庭神經鞘瘤病人術前常規應用EPO治療能使瘤體迅速增長，用免疫組織化學染色的方法確定腫瘤細胞有EPO和E-POR基因的表達，推測EPO可能與該腫瘤的發生有一定關系。

脂質體為一種生物膜雙分子層囊性微球，由水相中脂質雙層疏水區的脂肪鏈通過疏水鍵相互聚集自行收縮排列而形成，脂質體可用于包封各種捕獲于雙分子層內部或雙分子層中間的水相中的親水性化合物，或則捕獲于雙分子層內的疏水性化合物，它們特別適于通過包封水溶性差或在治療劑量下表現出不可接受的毒性的化合物從而釋放生物活性物質。專利申請CN1298296提供了一種EPO脂質體，其使用了甘油并制備成小單層脂質體的溶液，在脂質體中引用甘油或其它保護劑，會帶來其他不可預料的影響；并且該申請脂質體的制備采用乙醇注射法，而少量乙醇的存在會導致膜材韌性不足，脂質體的泄漏率增大；另一方面該申請的脂質體主要為小單層脂質體，其包裹EPO緩釋作用未達到最佳。

發明內容

本發明所解決的技術問題是提供一種穩定性好，且緩釋作用良好、半衰期較長的非腸胃性EPO脂質體。

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種EPO脂質體，其含有：

a)有效量的EPO或EPO衍生物；

b)中性磷脂；

c)膽固醇或其衍生物；

d)類脂化合物；

e)緩沖液。

其中磷脂與膽固醇或其衍生物、類脂化合物的摩爾比為5～10∶1～5∶1～3，上述脂質體為小單層和大多層脂質體共存的脂質體，其粒徑50～2000nm，優選100～1000nm，平均粒徑在300～600nm之間。

EPO衍生物包括基因重組人EPO，以及經過其他化學、物理或生物化學等方法修飾過過的重組人EPO，重組人EPO包括含165個氨基酸的α型和β型EPO；修飾過的重組人EPO，主要是氨基甲酰化EPO，包括經過修飾的過-或次氨基甲酰化EPO，或經過生物化學等方法修飾的免疫原性下降或消失的EPO組分。其中，脂質體所包含的EPO單位劑量中含EPO活性成分1000-10000IU/ml，優選3000-5000IU/ml。

用于制備脂質體的有磷脂選自卵磷脂、大豆磷脂，磷脂酰肌醇、腦磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、蛋磷脂酰膽堿、二棕櫚酰-DL-a磷脂酰膽堿、神經鞘磷脂、鞘髓磷脂、二肉豆蔻卵磷脂、二鯨蠟磷酸酯，上述磷脂都不帶電荷，本發明優選卵磷脂。

膽固醇及其衍生物，如膽固醇、膽固醇乙酰等的關鍵作用是和磷脂一起，將膜材的相變溫度調節到預期的目標，客觀上起到可以調節雙分子層流動性、通透性、增加脂質體膜材的柔韌性等目的，本發明優選膽固醇。

合適比例的類脂化合物可以改變脂質體表面電荷性質，用以防止脂質體凝聚、融合，改變劑型，制備凍干劑，避免滲漏，延長脂質體保存時間、防止脂質體絮凝沉淀。如果比例不合適，將導致脂質體加速破裂，滲漏率加。

類脂化合物是具有長或短的碳原子鏈的類脂肪化合物，在脂質體膜材中與磷脂一起成膜，使脂質體膜帶有一定的特性，例如帶有正電荷的類脂化合物有硬脂酰胺、磷脂酰乙醇胺等、還有一些諸如PEG化的磷脂酰膽堿，或耦聯有單克隆抗體的磷脂。本發明優先硬脂酰胺或磷脂酰乙醇胺。

上述緩沖液為非用作腸胃性的緩沖溶液，可選自pH值為6.4～7.4范圍內的磷酸緩沖液，Tri-HCl緩沖液，碳酸鈉緩沖液或NaCl溶液。